临床常见病原体检查

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1、第9章临床常见病原体检测Chapter9PathogenDetectiontestsDepartmentLaboratoryMedicineProf.ZhengjunYiyizhengjun@126.com教学目的与要求：Objective﹠Requirement1掌握临床病原体检查的相关流程（标本采集、标本验收、药敏检查、耐药性检测、临床常见病原体、病毒性肝炎、性传播疾病、医院感染）2了解其检测原理3掌握其临床意义和应用提纲(Outline)Section1：标本的采集运送、实验室评价和检查方法Section2：病原体耐药性检测Section3：临床感染常见病原体检测Sectio

2、n4：病毒性肝炎检测Section5：性传播疾病病原体检测Section6：医院感染常见病原体检测基本原则1：正确的标本类型和采集部位以反映有效病程2：采集和运送应无菌操作，避免污染3：尽快送检4：视所有标本为传染品，高度污染标本要有明显标识5：注意生物安全，标本用后要做消毒处理一、标本采集和运送（一）血液标本的采集适应症：疑似菌血症、败血症或脓毒血症的病人酒精棉球消毒，防止污染。静脉采血后，将血液注入培养瓶内。采集时间：一般在抗生素使用前，于发热初期或高峰期采血。采集频率：24小时内采血2~3次可提高阳性率，且在不同部位。采血量：血液与培养基的比例为1：5-10，一般成人血量5~

3、10ml，婴儿1-5ml。（二）尿液标本的采集首次晨尿，无菌采集中段尿10-20ml。排尿困难者考虑导尿采集标本。如考虑厌氧菌感染，采取膀胱穿刺法采集标本。（三）粪便标本采集自然排便者：挑取脓、血或粘液部分于清洁容器中送检。排便困难者：采用直肠拭子采集。怀疑霍乱弧菌感染引起的腹泻，立即接种或将标本置于碱性蛋白胨水或卡-布运送培养液送检。传染性腹泻应连续送检3次。（四）呼吸道标本采集类型：鼻咽拭、痰和经气管采集的标本。采集时间：晨痰，且在取痰前用清水反复漱口。方法：（1）自然咳痰法：（2）气管镜下采集法；（3）气管穿刺法。WBC≥25/lp,上皮≤10/lp。上呼吸道存在正常菌群，在

4、采集标本与结果分析时应予考虑。（五）脑脊液与其它无菌体液采集临床医生采用腰椎穿刺，抽取2-3ml，置于无菌容器中立即送检，不得保存于冰箱中。脑膜炎的主要病原体：脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌。（七）泌尿生殖道标本采集性传播性疾病取尿道口分泌物、外阴糜烂面病灶边缘分泌物、阴道宫颈口分泌物和前列腺液等。生殖道疱疹常穿刺抽取疱疹液。盆腔脓肿患者则于直肠子宫凹陷处穿刺取脓液。所有标本收集后于4℃保存直至培养（八）创伤、组织和脓肿标本损伤范畴较大的创伤，从不同部位采集多份标本，清除污物，以碘酒、酒精消毒皮肤。开放性脓肿：无菌棉拭子采集脓液及病灶深部分泌物。封闭性脓肿：无菌干燥注射器抽

5、取。疑为厌氧菌感染，取脓液后立即排净注射器内空气，针头插入无菌橡皮塞送检。二、标本的实验室质量评估标准1．标本必须注明姓名、年龄、性别、采集日期、临床诊断、检验项目等基本信自。2．仔细核对标本采集日期和送检日期。延误的标本，一般情况下不接收。通常用于细菌学检验的标本的存放不要超过24h。而病毒检测的标本可于4℃存放2～3天。3．检查送检容器是否完整，有无破损或渗漏等情况，若有则不予接收。4．标本储存、运送方式不当，不予接收。5．明显被污染的标本不予接收。6．标本量明显不足的标本，不予接收。7．同一天申请做同一实验的重复送检标本(血培养除外)，不予接收。8．对于烈性传染病标本的采集和

6、运送应严格执行相关规定，要有完善的防护措施，按规定包裹及冷藏，附有详细的采样及送检纪录，由专人护送。三、检查方法（一）直接显微镜检查（二）病原体特异性抗原检查（三）病原体核酸检查（四）病原体的分离培养和鉴定（五）血清学试验（一）直接显微镜检查染色标本目的：了解细菌的形态、染色性或观察宿主细胞内包涵体。方法：革兰染色、墨汁染色、抗酸染色、荧光染色革兰染色细菌的形态、染色性的特征阳性球菌（G＋S）阴性杆菌G-R真菌孢子意义1.无菌体液的直接镜检对病原体诊断具有重要意义。2.分离培养为阴性时的镜检往往在诊断中起关键作用。3.荧光显微镜用于标本经荧光染色后直接检出某些病原微生物4.电镜检查

7、不常规用于临床，对某些病毒感染却有确诊的价值。(二)病原体特异性抗原检查利用抗原抗体之间的特异性反应，用已知抗体检测患者血清及其他体液中的待测抗原，借助免疫荧光技术、酶联免疫技术、化学发光技术、胶乳凝集试验、对流免疫电泳等技术检测标本中未知的病原体抗原，其诊断价值常以标本不同而各异。标本中如果存在多种正常寄居微生物，可因交叉抗原存在而不能肯定诊断。检测细菌不同的抗原构造，还可分析细菌的菌群和血清型，如沙门菌属、志贺菌属和霍乱菌属等O1群霍乱弧菌的血清分型型别别名O抗原