寄生虫低温保存的研究现状-第三军医大学学报

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1、寄生虫低温保存的研究现状王爱民周国燕（上海理工大学低温医学与食品冷冻研究所，中国上海200093）摘要：低温保存寄生虫可消除传统保存方法的弊端，并可保持寄生虫原有的生物学特性。本文综述了寄生原虫和蠕虫低温保存的研究现状，着重从低温抗冻剂、降温过程和复温过程三个方面，探讨了不同寄生虫低温保存的最佳工艺，分析得出低温抗冻剂、冷冻速度和融冻速度是影响保存损伤程度的主要因素，为寄生虫低温保存研究提供理论帮助，并指出今后研究的方向。关键词：寄生虫，低温保存，低温抗冻剂，降温，复温TheResearchProgre

2、ssofCryopreservationofParasitesWANGAi-minZHOUGuo-yan(InstituteofCryo-medicineandFoodRefrigeration,ShanghaiUniversityofScienceandTechnology，Shanghai200093,China)Abstract:Thecryopreservationofparasitesnotonlycaneliminatelimitations,butalsocanmaintaintheori

3、ginalbiologicalcharacteristicsofparasites.Inthispaper,theresearchprogressofcryopreservationofprotozoaandwormsparasitesissummarized,ofwhichthecryoprotectant,freezingprocessesandthawingprocessesaremainlydiscussed.Andtheconclusionisgotthatthemostimportantfa

4、ctorsofcryopreservationofparasitesarecryoprotectant,freezingandthawingrates.Somekeysubjectsoffurtherresearcharepointedout.Keyword:cryopreservation,parasites,cryoprotectant,freezingprocesses,thawingprocesses寄生虫[1]是寄生在另一种动物体内来获取维持其生存、发育和繁殖所需的营养物质，并对寄生动物造成损

5、害的一种生物。十九世纪二三十年代，人们开始研究犬恶丝虫微丝蚴和猴疟原虫红内期保存。传统的寄生虫保存方法[2,3]有体外培养和动物转种，这些方法价格昂贵，繁琐，而且有一定的风险，往往容易发生遗传漂变、人为差错或混淆等问题。随着冷冻技术的发展以及液氮的使用，寄生虫的低温保存技术也发展起来。低温保存技术不仅能消除传统方法存在的弊端，而且能延长存活时间，保持原有的生物学特性。低温保存寄生虫可用于寄生虫的形态结构、生活史、致病性以及寄生虫病的药物筛选、免疫诊断和免疫预防，也为建立“寄生虫库”提供了简便、实用而有效

6、的方法，具有重要的使用价值和经济意义。本文着重从寄生虫的种类及低温保存技术两大方面阐述低温保存寄生虫的最新研究进展，并探讨该领域今后研究的主要方向。1寄生虫低温保存的种类近些年来，寄生虫的低温保存研究主要是原虫和蠕虫，它们因种类及发育阶段的不同所表现出的低温忍耐力也不尽相同。1.1寄生原虫低温保存的研究原虫类是寄生虫低温保存中研究比较早的一个种类，在20世纪70年代出现了许多与此有关的研究报道[4]。目前，有关原虫类低温保存的研究报道很多，主要有利什曼原虫、疟原虫、弓形虫等。成功保存利什曼原虫前鞭毛体以

7、及感染杜氏利什曼原虫的地鼠组织后，学者对利什曼原虫的低温保存进行了更多的研究[5]。疟原虫的研究早期主要集中在红内期和子孢子器，到20世纪70年代，成功用伯氏鼠作为载体低温保存疟原虫，随后在90年代疟原虫配子体成功保存[6]。这些成果为恶性疟原虫的体外连续培养奠定了基础，也为随后的体外筛选、抗体疫苗的研究以及基因组的研究提供了很大的方便。之后研究者对疟原虫的低温保存条件进行了更多研究，如用血液或者动物组织进行低温保存，并探讨了不加抗冻剂的低温保存的方法[7]。弓形虫的低温保存已经很普遍[8,9]，主要研

8、究速殖子，大多采用感染小鼠腹水加抗冻剂进行保存。其它原虫类的寄生虫如阿米巴原虫、人毛滴虫等的低温保存也有研究。如Fulton[10]等人用甘油作抗冻剂，成功的对阿米巴滋养体进行了低温保存。1.2寄生蠕虫低温保存的研究目前，寄生蠕虫的低温保存研究主要针对三个阶段：虫卵、幼虫、成虫。其中丝虫、吸虫的研究比较全面。丝虫是研究比较早的品种。在20世纪60年代以前，丝虫的冷冻以不加任何抗冻剂为主，且多数集中在丝虫微丝蚴方面[11,12]，60年代以后