属源单克隆抗体

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1、3.鼠源单克隆抗体鼠源单克隆抗体3.1鼠源单克隆抗体的产生历史3.2鼠源单克隆抗体的原理与制备3.3鼠源单克隆抗体的应用3.1鼠源单克隆抗体的产生历史1975年Köhler和Milstein仙台病毒使小鼠骨髓瘤细胞和羊红细胞免疫的小鼠脾细胞融合产生的杂交瘤细胞分泌抗羊红细胞抗体的能力，永生的特性．研究为利用B细胞杂交技术制备单克隆抗体翻开了新的历史篇章获得了1984年诺贝尔生理和医学奖鼠源单克隆抗体的产生历史杂交瘤技术的历史渊源：1847年BenceJones在骨髓瘤患者病人尿中发现本周蛋白，后经证实，其实质为抗体的轻链。鼠源单克隆抗体的产生

2、历史1957年Bernet提出了抗体产生的细胞系选择学说（克隆选择学说）：鼠源单克隆抗体的产生历史（单克隆抗体）1965年Sachs等用矿物油刺激Balb/C小鼠，诱生出骨髓瘤，称为P3。鼠源单克隆抗体的产生历史1972年Milstein等用8-杂氮鸟嘌呤（azaguanine）对骨髓瘤细胞进行诱导，筛选出缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase,HGPRT）的细胞系，称为P3-X63-Ag8。鼠源单克隆抗体的产生历史1964年Littlefield创建了

3、融合细胞的筛选技术，利用两种不同生化缺陷型的双亲细胞进行杂交，借助于含有次黄嘌呤、氨甲喋呤及胸腺嘧啶的HAT的选择性培养基，淘汰双亲细胞及非杂交融合细胞，选择杂交细胞。Hhypoxanthine次黄嘌呤Amethotrexate氨甲（甲氨）喋呤Tthymine胸腺嘧啶鼠源单克隆抗体的产生历史细胞融合是杂交瘤抗体技术的基础人们早就观察到在某细情况下或在体外培养中偶尔会有少数细胞可发生自发融合1958年冈田等用高浓度的仙台病毒使小鼠艾氏腹水癌细胞发生融合鼠源单克隆抗体的产生历史1975年Kao和Chaylu提出用聚乙二醇（polyethylene

4、glycol,PEG）作为细胞融合剂，融合率比仙台病毒高数百倍。目前作为融合剂的主要是PEG的衍生物。鼠源单克隆抗体的产生历史上世纪80年代末Zimmermana报道了电融合技术：在电场中沿电力线排列的细胞在高脉冲电场的作用下，细胞膜局部区域的脂双层之分子结构遭到破坏，出现微孔，细胞膜的通透性增加，继而相邻细胞融合。融合率与PEG相比呈几何级数的增加。鼠源单克隆抗体的产生历史杂交细胞合成抗体不存在等位基因排斥鼠源单克隆抗体的产生历史单克隆抗体的主要优点：它是由一个独立的细胞克隆产生的抗体，是一种十分明确的化学制品提供了用不纯抗原制备纯抗体的理

5、想方法。鼠源单克隆抗体的产生历史发展：杂交瘤与B淋巴细胞的融合或杂交瘤与杂交瘤的融合以产生双功能抗体，鼠骨髓瘤与人淋巴细胞的融合或人骨髓瘤与人淋巴瘤细胞的融合产生人单克隆抗体的技术相继出现。鼠源单克隆抗体的产生历史1984年用DNA技术改造鼠单克隆抗体使之人源化1989年出现噬菌体展示抗体库(phagedisplayantibodylibrary)转基因小鼠的出现使得分子生物学技术与鼠单克隆抗体技术结合起来20年代80年代比利时Louvain大学成功培育出用于制备杂交瘤的大鼠-Lou大鼠，培育了产生kappa-1a和kappa-1b两种不同轻

6、链的同种异型大鼠。鼠源单克隆抗体的产生历史3.2.1鼠源单克隆抗体的制备原理3.2鼠源单克隆抗体的原理与制备生化缺陷型骨髓瘤细胞和B细胞进行融合后，在体系中有5种细胞：随机融合产生的融合细胞：骨髓瘤细胞和B细胞，骨髓瘤细胞和骨髓瘤细胞，B细胞和B细胞未融合的细胞：骨髓瘤细胞B细胞筛选是关键鼠源单克隆抗体的制备原理1960年Barski在研究细胞杂交时发现，两种体细胞融合后，其中一些杂交细胞的核具有双方亲代的特征。1963年Littlefield首先提出了用选择性培养基分离杂交瘤细胞的方法。以后，Schwader将小鼠的骨髓瘤细胞和人

7、的外周淋巴细胞融合，所得到的杂交瘤细胞可以同时分泌人和鼠的免疫球蛋白。鼠源单克隆抗体的制备原理1975年Köhler和Milstein用仙台病毒将小鼠的骨髓瘤细胞与致敏的小鼠脾细胞融合，产生的杂交瘤细胞具有两个亲本的特性。经过反复的单细胞培养，形成既能分泌特异性抗体，又具有肿瘤细胞可在体外生长繁殖特征的单细胞株。从此开创了有目的的大量生产单克隆抗体的方法鼠源单克隆抗体的制备原理1.细胞生物合成DNA的主要途径-从头合成途径：鼠源单克隆抗体的制备原理四氢叶酸（FH4）作为甲基供体，参与嘌呤环和胸腺嘧啶的合成氨甲喋呤是二氢叶酸还原酶的不可逆抑制剂

8、，阻止FH2→FH4,故可阻止DNA的生物合成。2.补救途径合成DNA-节约利用途径需要次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶（HGPRT）和胸腺嘧啶核苷激酶（thymid