fmoc固相合成法合成黑色素细胞刺激素（msh）的工艺研究(1)

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1、Fmoc固相合成法合成黑色素细胞刺激素（MSH）的工艺研究(1)　　【关键词】固相合成；肽类；MSH；芴甲氧羰基　　【Abstract】AIM:Tostudytheprocessandinfluencingfactorsofsynthesizingthemelanocytestimulatinghormone（MSH）peptidebyFmocsolidphasesynthesis.METHODS:WithFmoctoprotecttheαaminoacid,TBTU/HOBT/DIEAwereusedascouplingre

2、agentstosynthesizethepeptideofMSH.Thesynthesizedpeptidewaspurifiedbythechromatographandidentifiedbymassspectrograph.RESULTS:Thepeptideyieldwas63%.Thesynthesizedpeptidepurityreachedto%afterbeingpurifiedbyRPHPLC.ThemolecularmassofthesynthesizedpeptidewaskubyMALDIMSand

3、itwasconsistentwiththetheoreticmolecularmassofku.CONCLUTION:Thismethodofsynthesisisrapid，simpleandeffectiveforthepeptideMSH,anditsfitforthelargescaleproduction.　　【Keywords】solidphasesynthesis;peptides;MSH;Fmoc　　【摘要】目的：研究9芴甲氧羰基（Fmoc）固相合成法合成黑色素细胞刺激素工艺的步骤及其影响因素.方法：采用Fm

4、oc保护α氨基，以TBTU/HOBT/DIEA为缩合剂合成MSH.用色谱仪和质谱仪对合成的多肽进行纯化、鉴定.结果：多肽合成的得率可达63%，经反相高效液相色谱仪（RPHPLC）对合成的多肽进行纯化后可得纯度为%的目标肽.通过基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪（MALDIMS）检测所合成多肽的分子质量为ku，与其理论分子质量ku相符.结论：该合成法具有快捷、简便、高效地合成多肽MSH的特点，适合大批量生产.　　【关键词】固相合成；肽类；MSH；芴甲氧羰基　　　0引言　　多肽作为生物体内的重要组成部分之一，在体内各脏器中有许多复杂

5、而特殊的生理活性［1］.黑色素细胞刺激素是由13个氨基酸组成的一种内源性的神经免疫调节肽，可抑制发热与主要类型的实验性炎症.固相法作为多肽合成领域的一个重大突破在合成多肽MSH中具有快速、简便、高效等优点［2］，但需要对不参与反应的氨基加以保护，同时氨基酸的侧链上的活性基团也要给予保护.保护基的选择既要保证侧链基团不参与反应，又要保证在肽链合成过程中不受破坏，同时还要保证在最后肽链裂解时能被除去［3］.国内外经常采用叔甲氧基（Boc）保护α氨基，却难以合成对酸不稳定的多肽.由于本次合成的多肽MSH中含有色氨酸，对酸不稳定.我们

6、旨在采用9芴甲氧羰基（Fmoc）基团保护α氨基以合成MSH.　　　　1材料和方法　　材料RPHPLC型高效液相色谱仪;基质辅助激光解吸附电离飞行质谱仪（MALDIMS，Hewleftpackar公司）；台式离心机（北京仪器六厂）；台式冻干机（军事医学科学院四环仪器厂）；Fmoc保护的氨基酸（Merck公司）；1羟基苯并三氮唑（HOBT），1氧3双二甲胺羰基苯骈三氮唑四氟化硼盐（TBTU,ABI公司）；二异丙基乙胺（DIEA），三氟乙酸（TFA,Sigma公司）；乙腈（Fisher公司）；NN二甲基甲酰胺（DMF），二氯甲烷（D

7、CM），异丙醇，FmocRinkAmideMBHAResin［吉尔生化（上海）有限公司］.　　方法　　树脂的选择根据导入反应基团的不同，可以把树脂分为氯甲基树脂、羧基树脂、氨基树脂或烯肼型树脂等［4］.本次Fmoc固相合成的MSH的末端需要酰氨化,故需要选用一种Rink氨基树脂即RinkAmideMBHAResin，在RinkAmideMBHAResin中加入缩合剂TBTU/HOBT/DIEA使MSH的Val与树脂之间形成酰胺键，以此来完成氨基酸的固定.　　与FmocRinkAmideMBHAResin的连接根据合成多肽的序列

8、，将RinkAmideMBHAResin置于已用DCM浸泡过的反应器中，加入DMF浸泡30min左右，使其充分膨胀，然后用含200mL/L哌啶的DMF溶液脱除树脂上的Fmoc基团，再用异丙醇洗涤树脂2次，最后用DMF洗涤树脂3次，当用50g/L茚三酮检测呈阳性时将FmocVa