固相合成法制备环肽hymenistatin1及其含statine的类似物

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1、固相合成法制备环肽Hymenistatin1及其含statine的类似物【关键词】固相多肽合成；HS1；Statine类似物；纯化ABSTRACTObjectivePreparationofHymenistatin1［HS1,cyclo(ProProTyrValProLeuIleIle)］anditsfourstatineanaloguesbysolidphasepeptidesynthesismethod,andthesynthesisprocessandinfluencing

2、factorsocorBocprotectedαaminoacids,HBTU/NMMascouplingreagent(linearpeptidesynthesis)andBOP/HOBt/DIEAascyclizingreagent,thecyclooctapeptideHS1anditsanaloguesolecularassspectrogram.ConclusionThetargetpeptidepoundsenistatin1(HS1)是由Pettit等［1］从太平洋Hymeniaci

3、don海绵中分离得到的一种环八肽。肽链序列为：cyclo(ProProTyrValProLeuIleIle)。有报道称HS1在小鼠成淋巴细胞白血病P388的研究中具有抑制细胞生长的作用，但结果并没有在后续的研究中得到充分证实［2］。Cebrat等［3］揭示了H1具有抑制体液和细胞免疫反应的免疫抑制作用。Poojary等［4］合成的HS1显示出对细菌生长的抑制作用，但对真菌的抑制作用不强；HS1的驱虫作用不大，但表现出一定的抗炎症作用。Zubrzak等［5］用1，5二取代四唑环修饰H

4、S1之后，修饰物的免疫抑制活性变化不大。Statine是羟甲基戊二酰辅酶A还原酶(HMGCoA，胆固醇合成限速酶)的竞争性抑制剂，具有多种免疫调节作用和细胞效应，且不依赖于血液胆固醇的降低。有研究表明，statine不但可以抑制IFNγ刺激诱导的人巨噬细胞、内皮细胞和平滑肌细胞的MHCII抗原的表达［6］，还可以选择性阻断整合素β2、白细胞功能抗原1(LFA1，即CD11a/CD18)的表达［7］。这些功能与statine对HMGCoA的抑制作用无关，提示statine也是一种潜在的免疫抑制剂。天

5、然HS1的生物学活性较弱，不能作为免疫抑制剂应用。本文研究拟采用statine对HS1进行修饰，以期能够有效提高HS1的免疫抑制活性。天然HS1结构中的氨基酸残基都是疏水性氨基酸，并且是环状结构，致使化学合成极其困难。为此，本文还希望通过修饰降低HS1的疏水性，提高HS1在水溶液中的溶解性。下面报道HS1及4个新化合物的设计、固相合成与分离纯化方法。1实验部分1.1仪器与试剂多肽合成仪(CS536，美国CSBio公司)，半制备型高效液相色谱仪(errifieldResin(取代值0.291mmol

6、/g，交联度1%，100～200目)、BocValF(二甲基甲酰胺)、DMSO(二甲亚砜)、DCM(二氯甲烷)、A(乙腈)、EDC［1乙基3(3二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐］、NMM(N甲基吗啉)和苯甲硫醚均由杭州中肽生化有限公司提供，哌啶经重蒸后使用，水为二次去离子水。1.2HS1及其类似物的化学合成本文所合成的5种环肽序列分别为：HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3Pro4Tyr5Val6Pro7Leu8)；A1HS1：cyclo(Ile1Ile2stat

7、ine3Pro4Tyr5Val6Pro7Leu8)；A2HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3statine4Tyr5Val6Pro7Leu8)；A3HS1：cyclo(Ile1Ile2Pro3Pro4Tyr5Val6statine7Leu8)；A4HS1：cyclo(Ile1Ile2statine3statine4Tyr5Val6Pro7Leu8)。虽然这5种环肽或环肽类似物的序列如上面所表示的非常相似，并且按照顺序给每个氨基酸残基

8、做了编号，但考虑到每个化合物的疏水性和空间位阻可能并不完全相同，加之合成的线性肽链终究要环化成环肽，因此，为了方便、有效地合成目的产物，我们选择接肽反应的第一个氨基酸也不尽相同。(1)HS1的合成路线与纯化树脂溶胀调用自编程序Method1，树脂溶胀的具体方法是将FmocProCTCResin4.76g(合成规模为2.0mmol)用200mlDMF浸泡30min，使之充分溶胀，然