bl21(de3)感受态细胞说明书

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1、杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1号楼东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-87381297BL21（DE3）感受态细胞说明书产品组成BL21（DE3）感受态细胞Cat.No.10支830401020支8304020BL21（DE3）感受态细胞100µl×10支100µl×20支ControlDNA（pUC19，0.1ng/μl）10μl×1支20μl×1支说明书1份1份产品储存1.感受态细胞必须用干冰运输，融化后的感受态细胞不能再冻结储存。如果用

2、户收到感受态细胞后发现泡沫箱中的干冰已经挥发殆尽，应予以拒收。2.收到感受态细胞后应立即储存在-70℃以下的冰箱中，在6个月内使用不影响转化效率；感受态细胞不可反复冻融，不要与限制性内切酶等经常使用的分子生物学试剂放在一起，避免因温度的波动而影响的效率。技术支持杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：E-mail:technical@simgen.cn，电话：400-0099-857。产品介绍本公司生产的BL21（DE3）感受态细胞是采用大肠杆菌BL21（DE3）菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞，可用DNA的化学转化。经pUC

3、19质粒检测，转化效率可达107cfu/μg。 每支感受态可以酌情分装使用，降低了实验的成本。BL21（DE3）菌株介绍基因型：F-，ompT，hsdS（rBB-mB－），gal，dcm（DE3）。特点：本菌株用于高效表达克隆于含有噬菌体T7启动子的表达载体（如pET系列）的基因。T7噬菌体RNA聚合酶位于λ噬菌体DE3区，该区整合于BL21的染色体上。该菌适合表达非毒性蛋白。质量标准  1. 使用1 ng pUC19 Plasmid质粒DNA转化100 µl Competent Cells DH5α测试，产生的菌落数 ＞1

4、×107 transformants/1µg pUC19 Plasmid 。              2. 100 µl的E.coli Competent Cells BL21（DE3）在含有 100 µg/ml Ampicillin的L-琼脂平板培养基上过夜培养40 hr不产生菌落。用户需自备的试剂与物品1.试剂：LB液体与固体培养基、抗生素。2.物品：弯头玻棒铺菌器、碎冰、水浴锅、超净工作台、摇床、移液器与无菌吸头、无菌1.5ml离心管、台式小量离心机（可配1.5ml离心管和2ml离心管的转子）。使用前准备1.感受态细

5、胞从-80℃取出立即置于冰上冻融，将水浴锅温度设置为42℃或将相应抗生素平板温育至37℃。www.simgen.cn仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。Ver.1杭州新景生物试剂开发有限公司区地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1号楼东4F邮编：310030电话：0571-87381295传真：0571-873812972.相应抗生素溶液。常规操作步骤1.从-70℃冰箱中取出感受态细胞置于冰上融化，如需分装可将刚融化的细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，再置于冰浴中。*一次转化感受态细胞的建议用量为50

6、-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。* 以下实验以100 μl感受态细胞为例。2.向感受态细胞悬液中加入目的DNA（1-10ng，且体积<10µl），轻轻旋转离心管以混匀内容物，冰浴30分钟。*转化效率与外源DNA的浓度在一定范围内成正比，但当加入的外源DNA量过多或体积过大时反而会降低转化效率。转化时DNA体积要小于感受态细胞体积的十分之一。 3.将离心管置于42℃水浴中90秒，迅速将管转移到冰上3分钟。*注意该过程不要摇动离心管。4.向离心管中加入900μl无

7、菌LB培养基（不含抗生素），混匀后置于37℃摇床振荡培养1小时（160-220转/分钟）。*该步骤的目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达，使菌体复苏。5.将已转化的感受态细胞低速离心（5000rpm,4分钟）后弃掉部分上清，保留100-150μl培养基，用移液器轻轻吹打悬浮菌体后，全部加到含相应抗生素的LB固体琼脂培养基上，用无菌弯头玻棒铺菌器将细胞均匀涂开。*如果预计的单克隆数量较多，可省略离心步骤，直接取200-300μl转化产物涂布平板（过多的菌液涂布可能会使单克隆菌落粘连在一起，难以挑取）。涂布后剩余的菌液可置于4℃

8、保存，如果次日的转化菌落数过少可以将剩下的菌液再涂布至新的平板上。6.将平板置于室温直至液体被吸收，倒置平板，37℃培养12-16小时可出现单菌落。简易操作步骤此步骤不适用某些抗生素抗性的质粒（比如卡那霉素抗性），若出现转化异常，请用常规步骤操作。1.将选择性固体培养基放于培养箱中预热至3