抗HBV核酶的研究进展

抗HBV核酶的研究进展

ID:19201654

大小:16.95 KB

页数:7页

时间:2018-09-29

抗HBV核酶的研究进展_第1页
抗HBV核酶的研究进展_第2页
抗HBV核酶的研究进展_第3页
抗HBV核酶的研究进展_第4页
抗HBV核酶的研究进展_第5页
资源描述:

《抗HBV核酶的研究进展》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库

1、抗HBV核酶的研究进展乙型肝炎病毒是引起乙型肝炎的病原体。在我国HBV感觉率达10%,而传统的抗病毒药物远期疗效均不显著,寻找新型抗HBV药物成为迫切需要。  核酶是一类具有生物催化功能的RNA,可定点切割RNA靶分子,从而达到有效阻断基因表达的目的[1]。通过合理的设计及操作,核酶可阻断HBV的复制及表达。所以在基因治疗领域倍受重视。  1核酶的类型及设计  到目前为止,人们发现的核酶共有六种类型。即Ⅰ类内含子、RNaseP、锤头状核酶、发夹状核酶、丁型肝炎核酶和VS核酶。通过对这六类核酶组成及

2、结构的研究,人们已经开始利用锤头状、发夹状核酶的特点,人工合成所需要的核酶。WEizsacker[2]、汤华[3]。竺来发等人[4]所设计针对HBV的核酶,均采用这种传统方式。Hselh等[5]则就HDV核酶研究对乙型肝炎病毒的阻断作用。对于核酶的合成,有两种方法。①是用DNA/RNA合成仪直接合成。②先合成核酶的双链或单链模板,然后用T4DNA连接酶将其整合并克隆至合适的表达载体,让其表达出核酶。这是一种简单、实用的方法。通过对这些核酶的深入研究,有助于有效控制HBV的感染。  提高核酶的稳定性

3、  由于血清和细胞内含有大量的核酸酶,体内表达核酶存在被降解的可能。因此目前大多数研究致力于提高体外合成核酶的稳定性修饰,也有关于体内表达核酶的稳定性的研究报道。在体外许多研究针对2’-OH进行修饰,以增加核酶的稳定性。如Taylor设计的DNA-RNA杂合核酶,即与底物配部分用脱氧核苷酸替代。结果其体外活性提高6倍,稳定性提高2倍。HEIdenreich则以2’-氟替代,发现提高了稳定性但也降低了剪切活性[6]。亦有以2’-甲基,2’-脱氨,2’-氨基,磷硫替代等修饰的报道。  核酶在细胞内提高

4、稳定性则通过装在tRNA反密码环或在核酶末端引入茎环结构来进行。连建奇在核酶两端设计顺式核酶也是一种有效的方法[7]。  提高抗病毒效率的方法  ①体外进化目前用的核酶,均为人工设计,但即使合理设计的核酶,催化效率也低于天然核酶。根据RNA分子进行技术提出进行体外筛选方法,在抗HIV中已有报道,对抗HBV也是一种可行的方法。②多位点核酶的联合作用,针对靶RNA分子的不同位点进行多位点破坏,进一步提高核酶的剪切率,这样既可防止HBV的变异引起变异逃避,也可减少空间构型的影响。许多设计都采用了这种思路

5、,如Weizsacker所用三个核酶的串联作用。③与定向技术相结合,如用HBV外膜蛋白包装含有HDV核酶的弱毒株,可使其定向作用于靶器官肝脏。日本学者山田修平设计抗HCV的核酶时,使用唾液粘蛋白定向等等。④核酶与反义技术相结合。核酶与RNA诱饵相结合,这种方法在抗HIV核酶中已有许多研究,如Homman等人的报道,抑制效率可提高4~7倍[8]。  目前的研究现状  抗HBV核酶的研究是核酶应用研究的一个热点。竺来发等人设计针对HBcAgmRNA编码序列的核酶。在Mg++存在下,将137nt的核酸准

6、确地水解得到97nt和40nt两个片段,可有效地剪切HBV的mRNA。王平等人针对HBV的前c/c基因设计了锤头状核酶,经体外转录后可定点切割靶RNA[9]。同时在HepG2细胞中亦可显著抑制HBeAg、HBsAg的表达。Weizsacker构建了串联的核酶,分别针对HBV2029、2044、2049位点,结果表明三个核酶同时具有剪切作用,Beck设计也针对HBV包装点的锤头状核酶,体外剪切靶RNA,用U6snRNA表达核酶与HBV共转染,也可有将效切割RN[10]。Hsieh则将丁型肝炎核酶改造

7、,利用外膜为HBsAg的特点。可将抗HBV的核酶靶向导入肝细胞中,为乙型肝炎治疗提供了一条新途径。Welch使用三个发夹状核酶,在Huh7细胞中与HBV共表达,使其表达下降66%,对核酶修饰后,则抑制率达83%。真核细胞表达的成功,预示对HBV基因治疗是可行的[11]。  存在问题及展望  抗HBV核酶的体外、体内的应用研究已取得了很大进展,但目前还有诸多问题问题尚待解决,如怎样选择敏感的靶位点,如何使核酶进入细胞,如何提高核酶的稳定性等。但就技术本身的发展潜力巨大。从已经进行的抗HIV核酶Ⅰ期临

8、床实验中,我们已经看到了抗HBV核酶发展的曙光。  参考文献  1Krugerk,GrabowskiPJ,ZaugAJ,etRNA:AutoexcisionandautocyclixationoftheribosomalRNAinterveningsequenceof,1982,31:147.  WEizsackerf,BlumH,WandsJR,CleavageofhepatitisBvirusRNAbythreeribozymetranscribedfromasingleDNA

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文

此文档下载收益归作者所有

当前文档最多预览五页,下载文档查看全文
温馨提示:
1. 部分包含数学公式或PPT动画的文件,查看预览时可能会显示错乱或异常,文件下载后无此问题,请放心下载。
2. 本文档由用户上传,版权归属用户,天天文库负责整理代发布。如果您对本文档版权有争议请及时联系客服。
3. 下载前请仔细阅读文档内容,确认文档内容符合您的需求后进行下载,若出现内容与标题不符可向本站投诉处理。
4. 下载文档时可能由于网络波动等原因无法下载或下载错误,付费完成后未能成功下载的用户请联系客服处理。