拟南芥突变体购买流程-完全图解

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1、最近要购买一批拟南芥突变体,想请教有经验的虫友购买拟南芥突变体的具体流程,例如我需要一个APETALA1的突变体,应到哪个网站进行搜索,怎样进行选择订购,越具体越好,有截图就更好了,谢谢大家了!lStep1.打开NCBI主页:http://www.ncbi.nlm.nih.gov/打开的页面如下:如下得到如下页面:进一步获得该基因在NCBI里面的基因信息,到此我为什么要做这一步呢,主要是想获得该gene在拟南芥中的系统名,见下图:记住这个名称:AT1G69120这个就是APETALA1(AP1)基因接

2、下来开始查找APETALA1(AT1G69120)的突变体,拟南芥突变体库世界上有很多,公开的没有公开私用的都有,突变的方法也不尽相同,有DS的,T-DNA插入的,Tos17,EMS方法突变的等等。。。。。。但是,我们通常用美国SALK研究所的突变体库,这个突变体库比较权威,从这里可以找到几乎现有的所有拟南芥突变体,包括T-DNA插入,RIKENFST等等各种不同的突变类型,而且有详细的突变位点介绍和购买方法它的搜索界面一目了然,使用也很方便。下面介绍SALK突变体库的使用方法:Step2:打开SAL

3、K主页:http://signal.salk.edu/点击T-DNAExpress进入(红圈处点击),如下显示:显示如下,所有信息全在如下窗口中从上述窗口中可以获得很多不同group制得的突变体,有SALKT-DNA,CSHLFST(冷泉港实验室的)等等,我个人建议使用SALK的突变体,订购比较方便,听同学说好像一百美元一个,上图中,蓝色下划线的那两个,以SALK_冠名的那个,两个显示的是不同的插入位置,和T-DNA插入方向(看在图中的位置和箭头方向)点击其中一个进入信息页,比如点击SALK_0567

4、08,得到如下页面:我们主要是从ABRC订购,点击进入页面,填写要求的相关信息,万事大吉。祝实验顺利!T-DNAPrimerDesign(PoweredbyGEBD)PleaseusethebackuppageservedbyAtTA,ifthetdnaexpressserverisdown.ThenewT-DNAPrimerDesignToolisnowpoweredbyGenomeExpressBrowserServer(GEBD).Thenewtoolcanreturntheprimersfas

5、ter,andalsogivetheinsertionlocationinformation,theestimatedT-DNAconfirmationproductsize,aswellasprimer3-likeformatoutput.(July28,2005)ImportantChange:NowtheRPisalwaysonthesideoftheflankingsequence,thatis,RPisalwaysonthe3'endoftheinsertion.Therefore,theP

6、CRreactionshouldalwaysbesetupasLB+RPforHMandLP+RPforWT.(Feb.04,2005)1.ProtocolforSALKT-DNAprimerdesignNote:N-Differenceoftheactualinsertionsiteandtheflankingsequenceposition,usually0-300basesMaxN-Maximumdifferenceoftheactualinsertionsiteandthesequence,d

7、efault300bpspZone-Regionsusedtopickupprimers,default100bpsExt5,Ext3-RegionsbetweentheMaxNtopZone,reservednotforpickingupprimersLP,RP-Left,RightgenomicprimerBP-T-DNAborderprimerLB-theleftT-DNAborderprimerBPos-ThedistancefromBPtotheinsertionsiteLB-Leftbor

8、derprimeroftheT-DNAinsertion:>LBb1ofpBIN-pROK2forSALKlinesGCGTGGACCGCTTGCTGCAACT>LBb1.3(NewlyusedbySalkGenotypingProjectandwithbetterresults)ATTTTGCCGATTTCGGAAC>LBa1ofpBIN-pROK2forSALKlinesTGGTTCACGTAGTGGGCCATCG>LB_6313RforSALKli

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