rna的提取及3种rna提取试剂盒的比较[1]

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1、RNA的提取及3种RNA提取试剂盒的比较[1]-----------------------页面1-----------------------科技情报开发与经济SCl-TECHINFORMATIONDEVELOPMENT＆ECONOMY2008年第18卷第lO期文章编号：1005—6033(2008)10—0206-02收稿日期：2008-03—03RNA的提取及3种RNA提取试剂盒的比较曹建斌(运城学院生命科学系，山西运城，044000)摘要：概述了RNA的提取以及一些注意事项，并对实验室常用的3种RNA提取试剂盒进行了比较。．关键词：RNA提取；纯化；试剂盒中图分类号：

2、Q75文献标识码：ARNA分子的分离提取是分子生物学研究中的基本内容，是进行基因纯化的mRNA可用于以下的实验．如RT—PcR，Northern印迹分析。表达分析的基础。典型的哺乳动物细胞中含有的RNA大约为104雌，其cDNA文库构建，mRNA末端快速扩增(RACE)．差异表达(DDRT—PCR)，中80％一85％是核糖体RNA(主要是28S，18S，5．8S和5S四种)，剩余的引物延伸反应(PrimerExtension)。RNA标志(RNAlabeling)等。15％一20％中大部分是由不同的低相对分子质量的RNA(转运RNA和小l-3RNA的定量与纯度核RNA)组成。

3、另外，还有I％～5％的信使RNA(mRNA)。在细胞内mRNA若RNA样品较纯，通常用分光光度法来定量测定，测量在260nm虽然含量少，碱基组成及长度各异，但是这些mRNA分子实际上编码了波长处的吸收值(A。)。若样品中RNA含量较低或含有较多的杂质．则细胞内所有的多肽分子。我们研究细胞内基因的表达量，通常要提取分光光度法不能用于RNA的定量测定。因此，RNA提取结束后，要根RNA分子来进行研究，细胞内RNA分子的多样性和易被降解决定了其据大概产量稀释(一般用10mMTris．HCI，pH值为7．0来稀释)到适当提取过程的复杂性。本文介绍了RNA提取、纯化的一般步骤及其注意事

4、浓度范围．再用分光光度计测量。如庐l相当于RNA的质量浓度为40项。并对3种RNA提取试剂盒进行了比较。V唔,／mLo检测RNA的纯度，可以利用A。与A。两处读数的比值来估计1RNA的提取RNA的纯度。通常纯制品RNA的A—A，为1．9-2．0，若样品中存在严重污染，则A，矶t。的比值要低，就不能通过分光光度法进行精确定量。1．1RNA提取的步骤1．4RNA提取中的注意事项(1)匀浆处理。组织：称取一定量的新鲜组织在液氮中充分研磨，这高质量的RNA是进行基因克隆、基因表达研究等的前提，但由于个过程要迅速，并且使组织保持冰冻状态。悬浮生长的细胞：将细胞离RNA很容易被RNase

5、降解，并且RNa∞广泛存在且很难变性失活。RNA心，吸出培养液，用无菌冰冷的PBS(磷酸缓冲液)洗涤细胞，并离心收集提取的主要问题是尽可能地防止RNase的污染。因此．RNA提取中必须细胞，吸去PBS。单层培养细胞：吸出培养液，用无菌冰冷的PBS洗涤细注意以下事项：胞，吸去PBS。将上述处理的组织或细胞中加人裂解液．于室温用匀浆器(1)RNA操作区应保持清沽，并定期进行除菌；离心机、自动移液器、高速匀浆。试剂等应专用。(2)将匀浆物温育5rain，使核蛋白复合物完全解离。(2)用于RNA实验的玻璃器皿、塑料制品等应为专用。(3)在每毫升裂解液中加入0．2mL氯仿．剧烈振荡以充

6、分混匀样品。(3)操作过程中应戴El罩和一次性橡胶手套，并经常更换，以防止000(4)将混合物于4℃以12r／rain离心15rain，使混合物分为两手、臂上的细菌和真菌以及RNase带到试管或污染用具。相．DNA和蛋白质被抽提进有机相，RNA留在水相。将上层水相转移到(4)避免在操作中说话聊天，防止RNase污染。一个新的离心管中。(5)尽量使用一次性的塑料制品，避免共用器具，如tips，tubes等，以(5)在水相中加入异丙醇和RNA沉淀液，充分混匀后．室温放置20防止产生交叉污染，导致实验失败。min一30rain．沉淀RNA。(6)配制溶液用的酒精、异丙醇等应采用未开

7、封的新瓶。溶液需用(6)于4oC以12000r／rain离心15min，去上清．收集RNA沉淀。DEPC水配制(加0．1％DEPC至重蒸水或MiliQ级水中，过夜处理，灭菌(7)用75％的乙醇洗涤沉淀两次，重复上述离心过程。即为DEPC水)。(8)室温放置，让乙醇挥发殆尽。但不要让RNA沉淀完全干透，因为(7)所有玻璃制品、塑料制品都必须用O．1％的DEPC水浸泡过夜，然RNA完全f燥后会很难溶解。后灭菌，180℃烘干。(9)加入50斗L—100灿．的无RNase的水．反复吹打混匀，充分溶解(8)无法用