hplc测定血清中25-羟基维生素d_3和维生素a及应用

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1、儿科药学杂志2010年第l6卷第3期JournalofPedia—tric·41··论著·HPLC测定血清中25一羟基维生素D3和维生素A及应用阳利龙，银雪花，祝文兵，何周康(湖南省儿童医院，湖南长沙410007)[摘要]目的：建立人血清中25一羟基维生素D维生素A的高效液相色谱测定方法。方法：血清以甲醇沉淀蛋白质，用正己烷提取25羟基维生素D、维生素A，吹氮浓缩后用HPLC测定。结果：25一羟基维生素D”维生素A的线性范围分别为6．7～335．5nmol／L、0．136．64mol／L，方法回收率在90％～110％之间，萃取回收率大于70％，日内日间RSD小于6％。结论：该方法灵敏、准

2、确、快速．其测定的结果可为临床对相关疾病的诊断提供参考依据。[关键词]高效液相色谱法；25一羟基维生素D；维生素A[中图分类号]R969．1【文献标识码]A[文章编号]1672-108X(2010)03~041-03Determinationof25一hydroxy—vitaminD3andVitaminAinHumanSerumbyHPLCYANGLi—long，YINXue—hua，ZHUWen—bin，HEZhou—kang(TheChildren'sHospitalofHunanPr~ince，HunanChangsha410007，China)[Abstract]Objecti

3、ve：ToestablishanHPLCmethodf0rthedeterminationof25一hydroxy—vitamin、D3andvitaminAinhumanserum．Methods：ProteinSwereprecipitatedwithmethano1．VitaminAand25一hydroxy—vitaminD3inhumanserumwereextractedwithn-hexaneanddeterminedwithHPLC．Results：rhelinearrangesforthe25一hydroxy—vitaminDandvitaminAwere6．7～335

4、．5nmo~Land0．13～6．64moLL，respectively．rherelativerecoveryaveragedwasbetween90％一110％，theabsoluterecoverywasmorethan70％，themeaninter—andintra—assaycoefficientsvariationwas1essthan6％．Conclusions：Themethodissensitive，accurateandquick．Resuhsofdeterminationcanprovideareferenceforrelevantclinicaldiagnosi

5、softhedisease．[Keywords]Highperformanceliquidchromatography；25一Hydroxy-vitaminD3；VitaminA维生素A、维生素I)3是维持人体正常生理活动和2方法与结果机能的脂溶性维生素，缺乏这些维生素会导致多种疾2．1色谱条件病。目前，测定血清中25一羟基维生素D的方法有竞2．1．125一羟基维生素D3色谱柱：Hypemil0DS2柱争蛋白结合法(CPBA)、放射免疫法(RIA)、高效液相(4．6mmx200mm，5m)；柱温：30oC；流动相：甲醇一水色谱法(HPLC)等。测定血清中维生素A的方法有荧(85：15，V

6、／V)；流速：1．0mL／min；检测波长：265nm；进光法、HPLC等。本实验参考文献¨。j，采用HPLC法样量：20IxL。测定人血清中25．羟基维生素D维生素A的含量，可2．1。2维生素A色谱柱：HypersilODS2柱(4．6mm以为合理补充维生素A、维生素D提供实验室依据，也x200lnJn，5p,m)；柱温：30cC；流动相：甲醇一水(95：5，为临床对相关疾病的诊断提供参考依据。v／V)；流速：1．0mL／min；检测波长：325nm；进样量：1仪器与试剂10L。Agilent1100高效液相色谱仪(G1314A紫外检测2．2标准液的配制器，Chemstations工作

7、站)，AB135一S电子分析天平(瑞25一羟基维生素D：精密称取25-羟基维生素D，对士梅特勒．托利多)，HypensilODS2色谱柱(4．6mm照品适量，用甲醇溶解配成浓度为839p~mol／L的25-羟x200mill，5m)；25一羟基维生素D3对照品(德国基维生素D标准品贮备液，分别取该溶液适量，加甲Dr．Ehrenstorfer公司，含量99．5％)，维生素A对照品醇稀释，得25一羟基维生素D浓度为33．55t~moVL