维生素D代谢及25-羟基维生素D测定方法进展

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1、维生素D代谢及25-羟基维生素D测定方法进展1211△李水军，王思合，周建烈，余琛（1.上海市徐汇区中心医院中心实验室，上海200031；2.美国克利夫兰医学中心病理学与检验医学研究所，美国克利夫兰44195）△通讯作者，余琛,clab001@126.com.关键词：25-羟基维生素D；免疫酶技术；液相色谱技术；质谱技术功能性的维生素D主要包括维生素D3和维生素D2。维生素D除了具有传统意义上的骨骼效应，它还有着广泛的非骨骼效应，与心血管疾病、免疫疾病、糖尿病、肿瘤等疾病密切相关。25-羟基维生素D（25OHD

2、）测定是衡量维生素D营养状态的最佳指标。根据测定原理不同，目前25OHD的测定方法可分为多种，液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）具有特异性强、准确性高的特点，被认为是评价维生素D营养状况的“金标准”测定法。1维生素D的来源、代谢途径、生理意义及参考水平维生素D是一种必需的脂溶性维生素，在自然状态下，紫外线照射和食物源的补充是人体维生素D的主要来源。2010年美国医学科学院推荐不同年龄段人群维持骨骼健康所需维生素D的膳食参考摄入量（DRIs）为400～800IU/d，成年人最高可耐受摄入量为4000IU/d

3、。而实际上维生素D具有更加广［1］泛的非骨骼效应，维持正常维生素D水平需要摄入1000～2000IU/d。自身合成和食物源的维生素D2和维生素D3经血液循环进入肝脏，在维生素D-25-羟化酶作用下转化为25OHD2和25OHD3，总称为25OHD。25OHD主要在肾脏经25OHD-1α羟化酶的催化下转化成有生理活性的1,25-二羟基维生素D[2]（1,25(OH)2D）。维生素D、25OHD和1,25(OH)2D在人体内的半衰期分别为24[3]h、3周和4h。其中25OHD在人体比较稳定且浓度较高，能反映食物摄

4、入和自身合成的维生素D总量，以及维生素D的转化能力，因此25OHD被认为是衡[3-5]量维生素D营养状态的最佳指标。维持正常的维生素D水平对调节钙磷代谢至关重要。在维生素D缺乏的情况下，人体仅能吸收大约10%～15％钙和60％的磷，1,25(OH)2D通过与维生素受体结合，可提高肠道对钙磷的吸收效率，使钙吸收增加至30～40％，磷增加‐1/5‐[5]至80％左右。众所周知，维生素D具有传统意义上的骨骼效应，缺乏可能会导致儿童佝偻病、成人骨质疏松症、软骨症、肌无力，增加老人跌倒和骨折的风险。近年来研究表明，维生素

5、D还具有很多与自身免疫疾病、糖尿病、心血[3-5]管病、肿瘤等有关的非骨骼效应。分子机理研究发现，维生素D缺乏会直接[6]影响人类基因的表达，这些基因与风湿性关节炎和糖尿病等许多疾病有关。25OHD是维生素D营养状态的评价指标，最近美国医学科学院推荐25OHD[1]的血浓度大于20ng/mL有利骨骼健康，而许多文献将维生素D缺乏定义为血清25OHD水平低于20ng/mL,不足为21～29ng/mL，充足为30ng/mL以上，[1,5]而大于150ng/mL可能会导致中毒。但是维生素D中毒极为罕见,而维生素D缺乏

6、却十分常见，这与年龄、人种、肤色、生活习惯等等有关。据估计，全球[5]有超过10亿人缺乏维生素D。2维生素D的测定方法和原理通过测定25OHD浓度来评价维生素D水平，现有多种方法用于临床25OHD的测定，根据方法原理，可分为酶免疫分析法和色谱法。由于所有的维生素D羟化物都可能发生抗体抗原结合反应，因此酶免疫分析法只能测定25OHD总量，无法同时测定25OHD2和25OHD3的浓度。现有25OHD的色谱分析方法包括高[7]效液相色谱法（HPLC）和液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）。由于可分离并检测不同的分

7、析物，色谱法可区分并能分别定量25OHD2和25OHD3。3维生素D测定方法的评价由于25OHD的测定结果影响维生素D的营养状况的判断，测定结果准确与否、不同的测定方法之间是否一致，至关重要。经过比较发现，由于基于不同[7-13]的测定原理和操作程序，不同的25OHD测定方法之间可能存在一定的差异。酶免疫分析法是早期维生素D测定的主流方法。2003年国际维生素D代谢物室间质评计划（DEQAS）的18个国家95家实验室中90％的25OHD测定方[9]法为酶免法，其中DiaSorin放免法和IDS放免法分别占38％

8、和27％。酶免法在自动化操作、节省人力方面具有一定的优势，适合于常规临床实验室开展，不足之处在于特异性低。酶免法对基质效应敏感，容易与其他非目标化合[14]物产生交叉反应。部分酶免法对于25OHD2的测定存在问题，有报道IDS放免‐2/5‐法对25OHD2的回收率低，当血样中25OHD2浓度较高，25OHD测定结果可能偏低[15]。当病人服用维生素D2补充剂治疗维生素D缺乏时，酶疫法测