生地黄止血作用药效物质基础的初步研究

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1、时珍国医国药2011年第22卷第8期LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL．22NO．8生地黄止血作用药效物质基础的初步研究王梅，张丽娟，郭东艳。(1．陕西中医学院附属医院，陕西咸阳712000；2．陕西中医学院2008级研究生，陕西咸阳712046；3．陕西中医学院·药学院，陕西咸阳712046)摘要：目的初步筛选生地黄止血作用的药效物质基础。方法采用经典的系统溶剂法(极性由小到大：石油醚一醋酸乙酯一正丁醇一乙醇)提取生地黄水煎液，用剪尾法和毛细玻管法测定出、凝血时间，比较各部位的止血作用；将筛选出的有效部位用大

2、孔吸附树脂进行分离纯化，不同浓度乙醇进行梯度洗脱，用剪尾法和毛细玻管法测定出、凝血时间，比较各洗脱部位的止血作用。结果乙醇部位可明显缩短小鼠的出、凝血时间；水洗脱液、30％乙醇洗脱液、80％乙醇洗脱液均能缩短小鼠的出、凝血时间，水洗脱液剂量与止血作用有明显的正相关性，30％乙醇洗脱液量效关系不明显，80％乙醇洗脱液止血作用量效关系呈现负相关性。结论生地黄止血作用的药效活性物质大多存在于乙醇部位，其止血作用的活性成分与糖类、环烯醚萜苷类有关。关键词：生地黄；止血；有效部位D0I标识：doi：10．3969／i．issn．1008-0805．2011．08．060中图分类号：

3、R285．5文献标识码：B文章编号：1008．()805(2011)08．1938-01生地黄为玄参科植物地黄RehmanniaglutinosaLibosch的干2．1．2大孔吸附树脂提取分离部位取一定量乙醇部位加水适燥块根，其味甘、寒，归心、肝、肾经，具有清热凉血、养阴，生津之量稀释，上于已准备好的HPDIO0型大孔树脂柱上，先用水洗功效。临床应用广泛，主要用于治疗血热出血证，现代临床脱至还原糖反应呈阴性(Molish反应检测)后，改用30％乙醇洗用以治疗原发性血小板减少性紫癜、功能性子宫出血等疾病。唐脱至Shear试剂反应呈阴性，换用80％乙醇洗脱。收集水洗脱代孙思

4、邈《千金方》中收载药方生地黄汤，由生地黄与大黄组成液、30％乙醇洗脱液及80％乙醇洗脱液，分别浓缩，水浴蒸干，用(30：1)，具有凉血止血的功效，主要用于吐、衄血百治不愈。现蒸馏水配成高、中、低浓度溶液(每毫升分别相当于原药材1．50代医家多用它治疗崩漏，临床上取得了显著疗效。本实验旨在进g，0．75g，0．25g)备用。一步探讨方中主要药味生地黄止血作用的活性部位，为进一步研2．2止血作用实验研究究止血作用机制及制剂开发奠定基础。2．2．1系统溶剂法提取各部位对小鼠出、凝血时间的影响取昆1材料与仪器明种小鼠96只，早6各半，体质量(20±2)g左右，随机分成81．1动物

5、昆明种小鼠，雌雄各半，体质量(20±2)g。由西安交组。各组每天灌胃给药1次，每次0．4ml，连续给药7d，空白对通大学医学院实验动物中心提供，合格证号：SCXK(陕)第2007照组给予蒸馏水。实验前禁食，至第8天上午给药40rain后，固—001号。定小鼠，用一次性玻璃毛细管插入小鼠眼球后静脉丛取血，至玻1．2药物生地黄(西安盛兴中药饮片有限责任公司，批号：璃毛细管内充满血液为止，置于水平处，每隔30S折断玻璃毛细090701)，云南白药(云南白药集团股份有限公司，批号：管0．5em，并缓慢左右拉开，观查有无血凝丝出现。眼球取血的20090413)，石油醚，醋酸乙酯，正

6、丁醇，95％乙醇(安徽安特生物同时以利剪将小鼠尾尖3mm处横断，待血液自行流出开始计化学有限责任公司，分析纯)，蒸馏水。时，每隔30s用滤纸片吸去血滴1次，直至出血自然停止(滤纸1．3材料蒸发皿、烧杯、电子记重秤(JY一2002，上海精密科学吸时无血)为止，记录出血及凝血时间。将所得数据用±s表仪器有限公司)、毛细管(内径0．9～1．1mm，长10enl，华西医科示，并进行统计学处理(SPSS17．0)。结果见表1。大学仪器厂)，灌胃针头，注射器，滤纸，秒表，解剖刀。表l系统溶剂法提取各部位对小鼠出凝血时间的影响(i±s)s1．4仪器SHB—HI循环水式多用真空泵(郑州长

7、城科工贸有限公司)，旋转蒸发器RE一52AA(上海亚荣生化仪器厂)，电热恒温水浴锅HH一2型(北京科伟永兴仪器有限公司)，真空干燥箱ZKF040型(上海实验仪器厂有限公司)，GB204电子分析天平(瑞士梅特勒)。2方法与结果2．1样品溶液的制备2．1．1系统溶剂法提取部位称取生地黄1kg，加水浸泡30rain后煎煮1h，滤过，浓缩至500ml备用。采用系统溶剂法，依次用与对照组比较，P<0．05，P<0．01石油醚、醋酸乙酯、正丁醇分别萃取至近无色，回收溶媒，浓缩成实验结果表明，与空白对照组比较，乙醇部位可明显缩短小浸膏，备用