产甘露聚糖酶的菌株的选育，甘露聚糖酶的分离纯化以及应用研究

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1、山东大学硕士学位论文产甘露聚糖酶的菌株的选育，甘露聚糖酶的分离纯化以及应用研究姓名：王梅申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：陈秀兰;张玉忠20040510原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：鱼i&日期：立竺经6自文q关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校

2、保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：立查鱼导师签名：}幺盂丝日————一些垒查兰堡!．．兰些丝苎摘要0一甘露聚糖酶(13-1，4-O-mannanmannohydrolysc：EC3．2．1．78)是一种降解甘露聚糖、葡萄甘露聚糖、半乳甘露聚糖和半乳葡萄甘露聚糖的主链B1，4一DH露吡Ⅱ障糖苷键的酶。§一甘露聚糖酶特别是内切昼一甘露聚糖酶主要用于造纸

3、纸浆漂白，油井戤胶，近年柬以降解植物胶生产功能性甘露低聚糖，以及在饲料工业中用作添加剂以解阶抗营养因子方面的应用备受重视。本文以角豆胶为唯一碳源，从四川魔芋地的土样中筛选得到了一株高产B一甘露蒙糖酶的细菌，通过形态观察和生理生化实验初步鉴定为芽孢杆菌属，命名为：MSJ一5。初步优化了该菌的产酶配方为：3．5％魔芋粉，1．O％蛋白胨，0．5％酵母膏，起始pl【咒8．5。培养温度为32"(2，220rpm，培养32小时即达产酶最高峰，酶活为，642U／ml。发酵液离心去菌体，上清液经硫酸铵沉淀，重溶透析，超滤浓缩，上SephadexG一100}i层析，以及DEAE

4、—Sepharose离子交换柱等步骤，得到了SDS一凝胶电泳纯的甘露聚糖酶：用SDS一凝胶电泳测得分子量为38．1KD，用凝胶等电聚焦电泳测得等电点为4．8，酶畦最适反应温度为504C，最适pH为7．O，在pH5，O-7．0比较稳定。2retool／1的EDTA使醮活剩余为原来的40％，EDTA量增大，酶活不再降低。电泳纯的酶水解0．5％角豆胶的广物经薄板层析，产生寡糖，不产生单糖，初步定性为内切B～甘露聚糖酶。SDS一聚丙烯酰胺电泳表明，该内切扫露聚糖酶在MsJ一5的胞外分泌蛋白中含量非常高。从魔芋精粉中用乙醇沉淀法制得魔芋甘露聚糖，与角豆胶一同用纯化不同程

5、度莎甘露聚糖酶进行酶解，在此过程中测定甘露聚糖粘度随时间的变化和还原糖的J“生量，并将水解产物用薄板层析分析。结果表明，在酶解过程中，魔芋甘露聚糖和角豆胶的制度均在30min内降至最低，并且不断产生还原糖。用电泳纯的酶水解两种聚糖，只产生寡糖：用下分子筛的酶液水解，除产生寡糖外，还产生甘露单糖。以上结果表明，菌体艟sJ一5产生的H‘露聚糖酶在饲料、造纸、甘露寡糖的生产中具有很好的应用前景一4山东夫学硕士学位论文有待于进一步研究。关键词：甘露聚糖酶；饲料；寡耩；分离纯化山东大学硕士学位论文AbstractB—l，4-D-mannanmannohydrolyse；

6、EC3．2．1．78，cleaverandomlywithinthep。1，4-D—mannanmainchainofgalactomannan，glucomannan，galactoglucomannanandmannan．theyareveryimportantfortheenzymaticdigestionofhemicelluloses，oneofthemostabundantgroupofpolymersinnature．Whenlocustbeangumwasusedastheonlycarbonsourse，abacteriumproducing

7、neutral一0—1，4-D-mannanasewasisolatedfromsonlekonjacsoilofSiChuanprovince，ThebacteriumwastentativelyclassifiedasBacillusPP．basedonitsmorphologicalcharacteristics，andnarnedMSJ一5，TheresultwasfurtherconfirmedbythetestofBIOLOGGRAMPOSITIVEIDENTIFICATIONTESTPANELsystembasedOFlphysiologican

8、dbiocheroicalidenti