螺旋藻蛋白酶解产物的制备及其生物学功能评价

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1、天津商业大学硕士学位论文螺旋藻蛋白酶解产物的制备及其生物学功能评价姓名：崔永舶申请学位级别：硕士专业：发酵工程指导教师：陈庆森20090501摘要对于疾病，人们越来越倾向于预防而不是治疗，并逐渐认识到健康和营养的关系，想通过功能性保健食品抵销空气、水和食品中的污染物、致病菌和化学制品所带来的危害，维持和提高健康状态。螺旋藻作为迄今为止发现的营养最丰富、最全面的绿色天然食品，并且其富含多种营养成份及生物活性物质如藻蓝蛋白能产生很多生理效应，对螺旋藻的研究和应用也因而受到了越来越多的关注。目前世界各地都出现了很多螺旋藻的生产企业，但是，螺旋藻有不良的藻

2、腥味，制成食品会严重影响产品的口感和可接受性。生物活性肽作为一种蛋白资源的利用方式。不仅具有营养性小肽易消化吸收的营养特点，还具有抗过敏性、降低胆固醇、增强免疫力、促进肠道菌群平衡等诸多生理功能，开发和研究生物活性肽类食品在国际保健品行业中已成为一个焦点。本试验分别以超声波法、反复冻融法、高压均质法和反复冻融．超声波法破碎螺旋藻细胞提取食品级螺旋藻胞内混合蛋白，采用凯氏定氮法和吸光度法测定蛋白含量，对各方法的各种影响因素进行了正交优化，确定了反复冻融．超声波法为本试验中螺旋藻胞内蛋自的最适提取方法，其粗蛋自提取率为83．5％，提取条件为底物浓度10

3、％，冻融时间4小时，反复冻融5次，超声功率1000w，超声时间9min，间隔时间25rain。提取的蛋白经10000Da超滤去除小分子杂质冷冻干燥制成干粉后，分别用碱性蛋白酶水解和模拟胃肠道蛋白酶水解，水解时研究了各因素对结果的影响，得到碱性蛋白酶对螺旋藻蛋白的最佳水解条件为：pH7．0，酶底物比2．2％，反应时间160rain，反应温度50℃，耗碱3．2850mL，水解度与htot之比为120．20％，试验后TCA．NSI为27．73％：而模拟胃肠道蛋自酶水解中胃蛋白酶水解的最适条件为：pH2．0，酶解温度37℃，加酶量2．O％，底物浓度3％，水

4、解时间180min；胰酶水解的最适条件为；pH7．0，酶解温度37℃，加酶量5％，底物浓度3％，水解时间240rain。模拟胃肠道水解后水解度为24．79％，TCA-NSI为34．66％。得到的水解液最后用10000Da超滤去除大分子物质，旋转蒸发并冷冻干燥后制得水解肽粉。然后将所制得的螺旋藻蛋白及其水解肽粉灌胃正常小鼠，取其粪便，采用选择性培养基TPY培养基、M17培养基、VRBDA培养基、叠氮钠．结晶紫．七叶苷培养基、麦康凯培养基对肠道内双歧杆菌、乳酸杆菌、肠杆菌、肠球菌和肠道致病菌进行培养和鉴定计数，统计结果表明螺旋藻蛋白及其水解肽对小鼠肠道

5、双歧杆菌、乳酸杆菌增殖有一定的影响作用，同时还能抑制致病菌、肠杆菌的增殖，对肠球菌的作用不很明显。灌胃后整个肠道的定植抗力即E／B值要显著增大。而在对大鼠喂养高脂饲料的同时，灌胃其螺旋藻蛋白及其水解肽观察对血脂水平影响的试验结果表明在高脂饲料的同时灌胃螺旋藻粉及其蛋白可极显著(P

6、和模拟胃肠道蛋白酶对螺旋藻胞内蛋白水解，获得其相应水解肽并采用动物实验评价了其对小鼠胃肠道区系的影响和在高血脂饮食时对大鼠血脂水平的影响这两个生物学功能，为螺旋藻及其蛋白的深加工利用提供了基础和理论依据。关键词：螺旋藻蛋白水解肠道微生物区系血脂ABSTRACTThereisagrowingpreferenceforpreventionratherthantreatmentfordiseaseandpeoplerealizethattherelationshipbetweenhealthandnutritionisimportment．Peoplew

7、anttointakefunctionalhealthfoodswhichwouldoffsethazardsbroughtaboutbytheair,waterandfoodpollutants，pathogensorchemicalproductionstomaintainorimprovetheirhealthstate．Spirulina,oneoftherichestandmostcomprehensivenutrientgreennaturalfoods，hasarichvarietyofnutrientsandbioactivesub

8、stances，suchasphycocyanin．Thereisagrowingattentiononspirulina