螺旋藻蛋白水解物对小鼠血清中细胞因子的影响

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1、万方数据螺旋藻蛋白水解物对小鼠血清中细胞因子的影响王连芬，庞广昌，米小媛(天津市食品生物技术重点实验室，天津商业大学生物技术与食品科学学院，天津300134)摘要：为了探索螺旋藻(Spirulina)蛋白及其水解物对Balb／c小鼠血清中IL-10，TGF_a，IL一4，IL一6，TNF-a，IFN一丫，IL-lfl细胞因子的影响，采用盐析法从螺旋藻中提取可溶性螺旋藻蛋白，以胰蛋白酶水解得到螺旋藻蛋白水解物溶液。将所得水解物对4组Balb／c小鼠分别进行灌胃(两个灌胃组，其中一组灌胃螺旋藻干粉)、腹腔注射、尾静脉注射

2、，用EI。IsA试荆盒测定了各组小鼠血清中IL-10，TGF—a。11．-4，IL-6，TN卜a，IFN一7，IL-18细胞因子变化情况。结果表明，与相应空白组相比，每组中绝大部分细胞因子水平均有所提高，仅有个别给药方式的部分细胞因子有所降低(尾静脉注射的IL-10，腹腔注射的IL-4，灌胃组的TNF_a和lI．一lbD；螺旋藻干粉灌胃组与螺旋藻蛋白水解物灌胃组结果显示，细胞因子浓度都很低，且两组间相差也不大}3种给药方式中，腹腔注射的作用效果最为明显，尤以该注射下的IL一6浓度变化极为显著；腹腔注射的IL一10，以

3、及尾静脉注射下的IL一6、II，lB和IFN一7也相"-3显著，说明螺旋藻蛋白水解物通过对细胞因子水平的调节，进而对机体免疫功能发挥重要的调节作用。从给药途径角度，腹腔注射效果最为突出，说明螺旋藻蛋白主要是通过肠黏膜发挥作用，设法直接通过肠黏膜途径给药可能是一种最有效的给药方式。关键词：螺旋藻蛋白；细胞因子；免疫调节中图分类号：Q178．535文献标识码：A文章编号：1000—3096(2008)10—0051—05螺旋藻素有“微型绿色功能性营养宝库”的美誉，它的营养价值首先在于其富含大量的优质可溶性蛋白。随着人类基

4、因组序列分析和功能蛋白组学工作的进一步展开，越来越多的科学研究表明，在生命活动中(如分子识别、信号转导、细胞分化及个体发育等)起决定作用的并非是那些分子量大、结构复杂的蛋白质，而是那些结构相对简单的中、小分子物质——生物活性多肽[1]。这些生物活性多肽可以通过选择适当的蛋白酶，控制一定的水解度，水解某些蛋白质得到。它们极易被人体快速和多途径地吸收，营养并无损失，而且产生特定的生理功效比J，那么这种多肽是通过吸收进入机体内部起作用，还是通过肠黏膜应答起作用呢?关于这一问题目前国内外从细胞因子的角度来研究的相关报道很少，

5、本文将对此作一初步解释。作者通过对提取出的螺旋藻蛋白选择适当的蛋白酶进行水解，将其水解物用Balb／c小鼠通过灌胃、腹腔注射、尾静脉注射3种给药方式，观察其血清中IL-10，TGF-a，IL-4，IL-6，TNFa，IFN一7，IL-If]各自的浓度变化情况，探索螺旋藻蛋白水解物对细胞因子可能发挥的调节作用和作用途径，从而推测螺旋藻蛋白水解物对机体产生的免疫功能。镇；牛血清白蛋白BSA，电泳纯98％，中国医学科学院血研所产品；胰蛋白酶(酶比活力为250U／nag)，购自天津华生生物科技有限公司；小鼠血清ELISAIL

6、—10，TGF—Q，II。一4，IL-6，TNF-a，IFN一7和IL-1B试剂盒，均购自尚柏生物医学技术(北京)有限公司；Balb／c小鼠，雌性，清洁级，质量18～27g，由天津津南区实验动物养殖场提供。1．2仪器DL一6000B低速离心机，上海安亭科学仪器厂；JB-2A型恒温磁力搅拌器，上海雷磁新泾仪器有限公司；752型紫外可见光分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；3K15高速冷冻离心机，Sigma-LaborzentrifugenGmbH公司；FD-1型冷冻干燥机，郑州长城科工贸有限公司；MutiskanMK

7、3酶标仪，上海雷勃分析仪器有限公司。1．3方法1．3．1螺旋藻蛋白水解物的制备在研钵中加入螺旋藻干粉及石英砂，充分研磨1材料和方法兰萎晏言罢誓翥篡然董：荔莒怒YFGzNc。伽。，¨材料篓茎薯芸篇客鬣j芸谶嚣淼黧螺旋藻(s夕ir“zi，z口)粉产自内蒙古鄂托克旗乌兰(园yahoo．cnf庞广昌，通讯作者，022—81720699MarineSciences／V01．32。No．10／200851万方数据1．5h，观察到螺旋藻干粉颜色略有增深。将所得干粉用生理盐水溶解，置于4℃冰柜抽提2h，所得的细胞悬液在低速离心机离心

8、，取上清液。将上清液加入饱和硫酸氨溶液，充分搅拌[3]。冷冻离心，弃去上清液。重复多次。沉淀加入少量生理盐水溶解，调节pH为8，进行透析，得到螺旋藻蛋白，Folin一酚法测定蛋白质量浓度[41为6000mg／L，即6．6g。再加入定量的水，配成质量分数为1％的蛋白溶液，再在其中加入胰蛋白酶K’6]。调节恒温水浴温度为40℃，pH为7．5～8之间