盐泽螺旋藻藻蓝蛋白的分离纯化

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1、万方数据第28卷第4期2009年7月食品与生物技术学报JournalofFoodScienceandBiotechnologyV01．28No．4Jul．2009文章编号：1673-1689(2009)04-0521-04盐泽螺旋藻藻蓝蛋白的分离纯化于光1，马宇翔2，张成武3，李朝军¨(1．南京中医药大学基础医学院，江苏南京210046；2．中国药科大学生命科学与技术学院，江苏南京210009；3．南京师范大学江苏省分子医学生物技术重点实验室，江苏南京210097)摘要：固体硫酸铵沉淀盐泽螺旋藻藻胆蛋白，羟基磷灰石(HA)柱分离纯化具光敏效应

2、的藻蓝蛋白(C—PC)，光谱、电泳鉴定其纯度。体外细胞实验表明C—PC经光敏作用能更有效的抑制肿瘤细胞的生长。关键词：盐泽螺旋藻；藻蓝蛋白；光敏作用；肿瘤细胞中图分类号：Q949文献标识码：AIsolationandPurificationofC。phycocyaninfromSpirulinasubsalsaYUGuan91，MAYu—xian92，ZHANGCheng—WU3，LIChao—jun‘3(1．CollegeofPre-cliniealMedicine，NanjingUniersityofTraditionalChineseM

3、edicine，Nanjing210046，China；2．SchoolofLifeScienceandTechnology。ChinaPharmaceuticalUniversity，Nanjing210009，China；3．Molecular＆MedicalBiotechnologyLaboratory．NanjingNormalUniversity，Nanjing210097，China)Abstract：Inthisstudy，PrecipitatedC—phycocyanin(C—PC)fromSpirulinasubsalsab

4、ysolidammoniumsulphateandchromatographedonahydroxylapatitecolumn；TheisolatedC—phycocyaninthenidentifieditspuritybyspectrumandelectrophoresis．Furthremore，C—PCcouldinhibittumorcellsbyphotosensitizationprominently．Keywords：Spirulinasubsalsa，C—phycocyanin，photosensitization，tum

5、ourcells光动力治疗是借助于在病灶富集的光敏剂光照下产生自由基和活泼态氧实现对肿瘤细胞的杀伤作用。由于在正常细胞和肿瘤细胞的选择性上，光动力疗法更优于放疔和化疗，所以深受人们重视。藻蓝蛋白有光敏作用，且安全无毒，是一种有潜力的光敏剂，可用于肿瘤的光动力治疗[卜引。我们以目前国内外较少研究的盐泽螺旋藻为材料，分离纯化藻蓝蛋白，通过体外肿瘤细胞实验验证盐泽螺旋藻的藻蓝蛋白是否具有较强的光敏作用，以期为它在肿瘤的光动力治疗中的应用提供一定的理论依据。l材料与方法1．1实验材料盐泽螺旋藻(Spirulinasubsalsa)由以色列本古里昂大学

6、沙漠研究所微藻生物技术实验室提供。生长于Zarrouk培养基中，冷白荧光灯作为光源，光暗周期为14：10，光强为3000lux，在28℃恒温室通气培养，一般生长5d后于其对数生长后期收获。A375为人的恶性皮肤黑色素瘤细胞，U251为人的神经瘤细胞，L02为人的肝细胞，均为作者所收稿日期：2008—05—18作者简介：于光(1978一)，男，江苏簿安人，讲师，主要从事生化与分子生物学研究。*通讯作者：李朝军(1966一)，男，安徽阜阳人，教授，主要从事细胞生物学相关研究。Email：liehaojun@yahoo．COITI万方数据522食品

7、与生物技术学报第28卷在实验室购买并保存。1．2试验方法藻蓝蛋白的分离纯化对数期藻体反复冻融抽提藻胆蛋白，60％(w／v)饱和度的硫酸铵沉淀。沉淀溶于最小体积的1mmol／L的磷酸盐缓冲液(pH值7．O)中，并透析。经羟基磷灰石(HA)柱层析，磷酸盐缓冲液(pH值7．0)分步洗脱，立即进行280am光谱测定，收集峰尖部分[4]。1．3藻蓝蛋白的纯度及活性鉴定1。3．1纯度鉴定经SephadexG-100柱层析和7．5％的PAGE鉴定藻蓝蛋白的纯度。1．3．2活性鉴定藻蓝蛋白吸收光谱用日立557紫外可见光扫描仪测定(200～900nm)。室温荧

8、光光谱用日立MPF一4型荧光分光光度计测定，激发波长580nmL5』。1．4藻蓝蛋白亚单位的分离与鉴定若藻蓝蛋白的PAGE电泳为单一条带，再以12％的SDS—PAG