社会学其它相关毕业论文 鲍曼不动杆菌oxa-23、oxa-24耐药基因研究

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湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：社会学其它相关论文题目：鲍曼不动杆菌OXA-23、OXA-24耐药基因研究指导老师：XXX二〇一一年十二月十日 【摘要】目的研究临床分离的多重耐药鲍曼不动杆菌的OXA-23、OXA-24耐药基因研究。方法用微量肉汤稀释法测定最小抑菌浓度（MIC值）；PCR检测OXA-23、OXA-24耐药基因，并对扩增出的基因测序比对。结果90株鲍氏不动杆菌，均为多重耐药菌株，其中同时对5种抗生素耐药的占81.6%；检出6株携带OXA-23基因（全部对美罗培南和亚安培南耐药）、均未检出OXA-24基。结论某医院流行产OXA-23型酶的菌株，需要采取措施防止其进一步传播。【关键词】鲍曼不动杆菌多重耐药耐药基因鲍曼不动杆菌广泛存在于医院环境中，如呼吸机设备、消毒液、透析机、水龙头等[1]，是最常见的条件致病菌之一，可以引起多种医院感染，如肺炎、伤口感染、败血症和脑膜炎等。随着抗生素的广泛使用，多重耐药鲍曼不动杆菌不断发展。因此，研究鲍曼不动杆菌多重耐药分子机制，可为合理选择抗生素，采取有效措施防止耐药株进一步扩散提供理论依据。本研究对2004年1月～2008年7月临床分离的90株鲍曼不动杆菌的耐药谱进行了测定，对OXA-23、OXA-24耐药基因进行了检测。1材料与方法1.1实验菌株2004年1月至2008年7月分别从河北省8家医院ICU室、呼吸内科、神经外科、急诊科等收集到90株鲍氏不动杆菌，其中痰液标本82株、分泌物3株、尿液2株、咽拭子1株、耳分泌物1株、脓液1株。采用法国生物梅里埃(API)公司生产的VITEK-32型全自动微生物分析仪及配套试剂盒对细菌进行鉴定。1.2试剂和主要仪器 抗生素：美罗培南（MEM）、亚胺培南(IPM)、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)、左氧氟沙星(LEV)、头孢他啶（CAZ）、阿米卡星（AKN）、头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SB）购自中国药品生物制品检定所；DNA分子量Maker、dNTP、TaqDNA聚合酶等分子生物学试剂，均购自Sigma公司；PCR引物由博迈德科技发展有限责任公司合成，胶回收试剂盒购自Promega公司。主要仪器：台式低温高速离心机（江苏省太仓医疗器械厂），WGP-300型电热恒温培养箱（重庆万达仪器有限公司），HBPX220型PCR仪（Hybaid公司），凝胶成像系统（上海复日科技有限公司）1.3MIC测定采用WHO推荐的微量液体稀释法进行抗生素的最小抑菌浓度（MIC）测定，根据美国临床实验室标准委员会（CLSI）[2]标准判断结果。大肠埃希菌ATCC25922、铜绿假单胞菌ATCC27853和肺炎克雷伯ATCC70060作为质控菌。1.4基因PCR检测检测目的基因引物序列见表1。表1目的基因引物序列及产物基因检测：PCR反应体系均为50μl：10×PCR反应缓冲液5μl、2.5mmol/LdNTP4μl、10μmol/L上、下游引物各2μl、TaqDNA聚合酶1.0U、DNA模板100ng。PCR反应条件：94℃预变性5min；94℃25s，50℃45s，72℃90s，30个循环；72℃延伸10min。1.5测序和数据处理 对扩增阳性株PCR产物进行测序（上海生工）和序列比对（用软件DNAMAN5.2.2）。采用SPSS13.0统计分析软件进行数据分析，P0.05即为差异有统计学意义。2结果2.1标本类型90株鲍曼不动杆菌中，来源于痰标本最多，为82株，占91.2%；其他标本依次为分泌物3株（3.3%），尿液2株（2.2%）。2.2病区分布90株鲍曼不动杆菌中，分离自ICU最多，为30株，占33.2%；其他依次为呼吸内科18株（20.0%）、神经外科病房7株（7.8%）、急诊科6株（6.7%）等。2.3MIC法药敏结果美罗培南（MEM）、亚胺培南(IPM)敏感率分别为58.9%、51.1%，头孢哌酮/舒巴坦（CFP/SB）敏感率为30.0%、左氧氟沙星(LEV)敏感率为21.1%、哌拉西林/他唑巴坦(TZP)敏感率20.0%、阿米卡星（AKN）、头孢他啶（CAZ）敏感率分别为16.7%和15.6%。详见表2。表2鲍曼不动杆菌对抗菌药物的耐药谱（数量，%）2.4耐药基因扩增结果采用特异性引物对90株鲍曼不动杆菌分离株进行耐药基因扩增，扩增产物经1.3%琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察特异性条带。结果有10株OXA-23基因阳性，阳性率为10%；未扩增出OXA-24耐药基因。耐药基因型代表性菌株PCR扩增产物电泳结果见Fig.1。 Fig.1ThePCRproductofOXA-23generunon1.3%(w/v)agarosegelelectrophoresisM:Markers;4、5、8、9、11、12:A.baumanniilsolates3讨论β-内酰胺酶基因是鲍曼不动杆菌最主要的耐药基因，包括超广谱β-内酰胺酶类（属A类，包括TEM-型、SHV-型、SIM-型、PER-型等基因）、金属酶类（属B类，包括IMP和VIM基因）、OXA型酶（属D类）等[2,3]。OXA-23型酶，水解青霉素和头孢菌素、碳青霉烯，使菌株产生对亚胺培南类抗生素的耐药性[4]。鲍曼不动杆菌主要分布于重症监护病房(ICU)，占33.2%，其他依次为呼吸内科18株（20.0%）、神经外科病房7株（7.8%）、急诊科6株（6.7%）等，并且在所有标本类型中痰标本的检出率最高，占91.2%。鲍曼不动杆菌的耐药谱广，不易被抗菌药物所清除，感染后治疗非常棘手，特别是对那些免疫功能低下的危重患者将会导致非常严重的后果。D类碳青霉烯酶对亚胺培南、头孢噻肟、头孢他啶的水解活性较低，但常同时合并外膜通透下降和(或)主动外排系统增强等，因此耐药性较强[4]。故对OXA-23型β-内酰胺酶基因流行病区，应及时采取有效措施，防止高耐药和多重耐药株的进一步传播，以免给今后的治疗带来困难。也对医院不合理用药提出警告，在治疗不动杆菌引起感染时,必须合理使用抗菌药,避免多重耐药现象再次发生。在医院间转移病人时必须注意鉴定和追踪耐药不动杆菌[5]。参考文献[1]GuenthnerSH,HendlyJO,WenzelRP.Gram-negativebacilliasnontransientfloraonthehandsofhospitalpersonnel[J].JClinMicrobiol,1987,25:488-490. [2]傅爱玲,袭燕,李希华.20株多药耐药鲍氏不动杆菌β-内酰胺酶基因研究[J].中华医院感染学杂志,2008,18(5):622-625.[3]何崇旻,葛庚芝.不动杆菌耐碳青霉烯类抗生素机制的研究进展[J].中国医学文摘·内科学，2005，26(1):121-123.[4]LivermoreDM,WoodfordN.Carbapenemases:aprobleminwaiting?[J].CurrOpinMicrobiol,2000,3(5):489-495.[5]LuaPL,HuangLY,LianST.Howcarbapenem-resistantAcinetobacterspp.establishedinanewlyconstructedhospital[J].IntJAntimicrobAgents,2008,31:463-466.