82株鲍曼不动杆菌的耐药性及耐药相关基因研究

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1、82株鲍曼不动杆菌的耐药性及耐药相关基因研究Analysisofantibioticresistanceandresistancedetermininggenesof82Acinetobacterbaumanniistrains作者姓名：卢念红专业名称：临床检验诊断学指导教师：艾清副教授学位类别：医学硕士答辩日期：2015年5月28日摘要82株鲍曼不动杆菌的耐药性及耐药相关基因研究目的：通过聚合酶链反应（PCR）方法研究本院鲍曼不动杆菌的耐药机制，检测临床分离的82株鲍曼不动杆菌的耐药情况，并检测β-内酰胺类耐药基因、氨基糖苷修饰酶耐药基因、喹诺酮类耐药基因、I类整合酶

2、基因和外膜蛋白基因的阳性率，为今后临床用药提供参考依据。方法：1.收集从2011年1月至2014年5月吉林大学第一医院二部住院患者无菌TM体液标本中分离出的鲍曼不动杆菌（非重复菌株），共82株，用BDphoenix-100全自动细菌鉴定/药敏分析仪进行细菌鉴定和药敏试验，头孢哌酮/舒巴坦的药物敏感性检测采用K-B法；2.采用聚合酶链反应（PCR）法对β-内酰胺类耐药基因（blaOXA-51,blaOXA-23,blaTEM,blaSHV,blaIMP,blaVIM）、氨基糖苷修饰酶耐药基因（aac(6′)-I,aac(3′)-I,ant(3″)-I,ant(2″)-I）

3、、喹诺酮类耐药基因（gyrA,parC）、I类整合酶基因（intI1）和外膜蛋白基因（CarO）进行检测，1.5%琼脂糖凝胶电泳后，凝胶成像系统观察照相并分析。3.对喹诺酮类耐药相关基因（gyrA和parC）的PCR产物纯化后做HinfI酶切分析，2.5%琼脂糖凝胶电泳后，凝胶系统观察照相，随机选部分耐药株与敏感株测序分析并验证药敏结果。结果：1．药敏结果：82株菌中有65株MDRAB，所有菌株对多粘菌素100%敏感，对亚胺培南、美罗培南和头孢哌酮/舒巴坦的敏感率分别为41.5%、40.2%、29.3%，除阿米卡星、四环素、复方新诺明外，对其他药物的敏感率均低于20%。

4、2．耐药基因检测结果：82株菌均能检测到blaOXA-51、gyrA、parC基因，对blaOXA-23、intI1、blaTEM、aac(6′)-I、aac(3′)-I、ant(3″)-I、ant(2″)-I、CarO的检出率分别为52.4%、73.2%、70.7%、56.1%、56.1%、65.9%、12.2%、90.2%，未检出blaSHV、blaIMP、blaVIM等基因。I3．酶切结果：仅14（17.1%）株菌的gyrA基因产物能被HinfI酶切开，23（28.0%）株菌的parC基因产物能被HinfI酶切开，测序结果显示喹诺酮类耐药株有基因突变。喹诺酮耐药株

5、gyrA基因的83位氨基酸由Ser变为Leu，parC基因的80位氨基酸由Ser变为Leu；在parC基因被切开的耐药菌株中发现一种新的突变，84位氨基酸由Glu变为Gly，与以往报道的Glu变为Lys不同。结论：1.82株鲍曼不动杆菌耐药情况严重，大都为多重耐药鲍曼不动杆菌，碳青霉烯类抗生素敏感率最高；14种耐药基因能检测到11种，未检测到blaSHV、blaIMP、blaVIM等基因，可能存在地区差异性。2.携带blaOXA-23基因与鲍曼不动杆菌对碳青霉烯类抗生素耐药有关；产OXA-23、OXA-51、TEM型β-内酰胺酶可能是本院鲍曼不动杆菌对β-内酰胺类抗生素

6、耐药的主要原因。3.aac(6′)-I、aac(3)-I、ant(3″)-I基因在本院鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类药物耐药方面起重要作用，ant(2″)-I不是导致本院氨基糖苷类耐药的主要基因。4.喹诺酮类耐药基因gyrA、parC突变率高导致耐药情况严重，gyrA基因比parC基因在喹诺酮类耐药方面发挥更大的作用；在parC基因中发现新型突变模式，84位氨基酸由Glu变为Gly，但是否与喹诺酮耐药有关仍需验证。关键词：鲍曼不动杆菌，耐药基因，聚合酶链反应（PCR），基因突变IIAbstractAnalysisofantibioticresistanceandresista

7、ncedetermininggenesof82AcinetobacterbaumanniistrainsObjective:ThestudyaimstotoresearchthemechanismofdrugresistanceofAcinetobacterbaumanniiisolatedfrom82inpatientsattheFirstHospitalofJilinUniversity,investigatetheantibioticresistanceandmolecularsupportofresistancetoβ-lacta