鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因的研究

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1、鲍曼不动杆菌耐药性及耐药基因的研究【摘要】目的研究鲍曼不动杆菌耐药性与耐药基因之间的关系。方法用VITEK-2型全自动微生物分析仪,检测331株鲍曼不动杆菌和42株多重耐药菌的药敏情况,用PCR方法检测多重耐药菌的耐药基因。结果鲍曼不动杆菌对21种抗生素的平均耐药率分别为59.8%和62.8%；对头孢曲松、头孢唑啉和头孢替坦的耐药率均为100%；42株多重耐药菌株（100%）对头孢曲松、头孢呋辛钠、头孢呋辛酯、头孢唑啉、头孢替坦和氨苄西林完全耐药,且均检测有TEM-1和ampC基因;38株多重耐药菌均检测到TEM-1、ampC、a

2、ac（3）和gyrA型基因。结论鲍曼不动杆菌已成为医院重要致病菌,且多重耐药率很高，与携带的TEM-1、ampC、aac（3）和gyrA型基因有关。【关键词】鲍曼不动杆菌;多重耐药基因;耐药基因检测StudyonantibioticsresistanceandresistantgenesofAciobacterbaumanniiXUJing-feng，XU-Lin,FANilitarymand,Beijing100700，China【Abstract】ObjectiveObjectiveTostudytherelationship

3、betannii.MethodsTheantibioticresistanceandresistantgeneinedbypolymerasechainreaction（PCR）andultiresistanceofAciobacterbaumannii.ResultsTheresistanceratesofAciobacterbaumanniitoceftriaxone、cefotetan、cefazolinipenem、meropenemultiresistantisolatespCgene;38strainsultiresi

4、stantisolatesofTEM-1、ampC、aac（3）andgyrAgene.ConclusionThemultiresistanceofAciobacterbaumanniihascloserelationtoconitantpresenceofTEM-1、ampC、aac（3）andgyrAgene.【Keyannii;drugmultiresistant;drugresistantgenedetection鲍曼不动杆菌已成为医院获得性肺炎的重要致病菌,且很容易在监护病房流行。由于鲍曼不动杆菌在自然界的广泛存在及其复

5、杂的耐药机制,对β内酰胺类、氨基糖苷类以及喹诺酮类抗生素已呈现多重耐药，给临床治疗其所致感染带来很大困难。为能更好地指导临床选择合适的抗生素，本文对本院2005～2006年住院患者标本分离的331株鲍曼不动杆菌进行药敏分析,并对2006年分离的42株多重耐药鲍曼不动杆菌的基因进行测序和研究,现报告如下。1材料与方法1.1菌株来源331株鲍曼不动杆菌均为我院临床标本中分离并按全国统一操作规程〔1〕。标本主要包括血液、尿液、痰和其他分泌物。1.2仪器试剂VITEK-2型全自动微生物分析仪、ID-GN鉴定卡、AST-GN09药敏卡由法国

6、Bio-Merieux公司生产;VITEK比浊计（V1210）由日本生产；PCR扩增仪为美国PERKINELMER公司9600型基因扩增仪；日本三洋MDF型超低温冰箱;德国Hettich公司22R型低温超速离心机;美国水套式恒温培养箱。1.3菌种鉴定、药敏所有实验菌株分离纯化后按VITEK-2的使用要求配制成菌悬液和稀释液,分别填充到ID-GN和AST-GN09卡中,用VITEK-2仪器自动完成细菌的鉴定和药敏实验。1.4质控菌株由卫生部临床检验中心提供的标准菌株大肠埃希菌（ATCC25922）、铜绿假单胞菌（ATCC27853）

7、,药敏质控结果符合NCCLS药敏质控要求。1.5统计学处理〔2〕细菌耐药性分析用-26型大肠埃希菌分别作SHV型和TEM型阳性对照；其余ampC、PER-1、OXA-23基因阳性对照均为北京华明公司基因检测室经基因测序后比对的阳性菌株。1.7PCR耐药菌基因〔3〕根据GenBank提供的耐药基因，采用Primer软件设计引物（见表1）。反应体系均为25μl,其中缓冲液2.5μl,10mmol/L4×dNTP0.5μl,50μmol/上下游引物各1μl,DNA多聚酶0.25μl,DNA模板1μl,超纯水18.75μl。根据不同引物设

8、立不同PCR反应条件。以ATCC700603肺炎克雷伯菌作SHV型阳性对照，以TEM-26型大肠埃希菌作TEM型阳性对照,产物经电泳,在紫外线下观察结果,并在凝胶上成像。表1用于检测各种耐药基因的引物（略）2结果与分析2.1鲍曼不动杆菌的临床分布本