松树上几种线虫携带细菌的种类与毒性

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第27卷第5期西南林学院学报V0I．27No．52007年10月JOURNALOFSOUTHWESTFORESTRYC0LLEGE0ct．2oo7松树上几种线虫携带细菌的种类与毒性何月秋，池树友，韩正敏，张毅丰，王亚红(I．宁波城市职业技术学院，浙江宁波315211；2．宁波市森林病虫防治检疫站，浙江宁波315012；3．南京林业大学森林资源与环境学院，江苏南京210037)摘要：从不同地区不同松树上采集分离不同种类的线虫，对线虫携带的细菌进行分离鉴定，并用黑松

2、无菌苗及愈伤组织测定细菌的毒性．细菌分离结果表明：松材线虫携带的优势菌为荧光假单胞菌，与其他线虫携带的细菌种类不同．毒性测定结果显示：松材线虫携带的优势菌株毒性最强，拟松材线虫及滑刃属线虫携带的细菌具有一定程度的毒性，小杆线虫携带的细菌没有任何毒性．结果进一步证明了松材线虫携带的细菌在其致病过程中发挥着重要作用、关键词：线虫；细菌；种类；毒性中图分类号：Q939．1文献标识码：A文章编号：1003—7179(2007)05—0042—05松材线虫病[Bursaphelenchusxylophilus的种类和毒

3、性．(stainer&buhrer)Nickle]是松树的一种毁灭性病1材料与方法害，已在全球多个国家造成重大损失，但对病害的致病机理至今仍存在较大争议．近年来，有关细菌1．1线虫的分离、纯化与培养在松材线虫病致病过程中的作用引起了普遍关从南京市铁心桥镇采集感病枯死的15年生注．Kawazu、赵博光、谈家金、洪英娣等先后证明了马尾松(P．massoniana)木段，将采回的木段劈成松材线虫携带的致病细菌在松树萎蔫过程中起重小木片后分离松材线虫．从云南采集自然死亡的要作用¨j．洪英娣室内接种试验同时证明，松苗云

4、南松(P．yunanesis)木段分离拟松材线虫．的萎蔫与松材线虫携带的致病细菌密切相关，而从采集于连云港感染松材线虫枯死时间较长与线虫的种类关系不大．在自然界没有致病力或的马尾松上分离小杆线虫(Rhabditidasp．)．腐生性致病力较弱的拟松材线虫(B．mucronautus)与从滑刃线虫(Aphelenchoidessp．)由采自南京林业大学松材线虫体上分离到的致病细菌混合接种同样能树木园自然死亡的火炬松上(尸．taeda)分离．几种引起黑松(Pinusthunbergii)苗萎蔫及愈伤组织严线虫均采

5、用贝曼漏斗法进行分离j．挑取1O～2O条重褐变死亡．拟松材线虫在自然界对黑松不致雌、雄成虫放在长满灰葡萄孢(Botryscinerea)的病或致病力很弱，但在室内与致病细菌混合接种PDA平板上，25黑暗条件下培养10d后，对已经致病力却大大增强．出现这一结果的原因，目前还纯化的线虫挑取15～20条再进行一次纯化，然后将不能作出准确的解释，但不排除可能是拟松材线经过两次纯化的线虫在25℃条件下用灰葡萄孢大虫在自然界携带的细菌种类与松材线虫不同，拟量培养．松材线虫携带的细菌可能不致病或致病力较弱．1．2细菌的分离

6、、纯化与鉴定另外，在死亡的松树体内也常有一些腐生线虫存将分离到的线虫加入无菌水稀释漂洗，经在j，这些腐生线虫是没有致病性的，其携带的细1000r／min离心5min，吸去上清液，在解剖镜下挑菌种类尚不清楚，需要进一步了解．本试验从不同取单条线虫，放到NB培养基平板上，28℃温箱中黑松树上分离松材线虫、拟松材线虫和其他腐生线暗培养，48～72h后在培养基上可见沿线虫爬行踪虫，并从这些线虫体上分离细菌，以了解这些细菌迹有大量细菌菌落长出．挑取优势菌落并经过连续收稿日期：2007—07—13为通讯作者基金项目：国家

7、自然科学基金资助项目(30671683)．作者简介：何月秋(1975一)，女，四川成都人，博士，讲师，主要从事森林病理学的研究维普资讯http://www.cqvip.com第5期何月秋等：松树上几种线虫携带细菌的种类与毒性43平板划线对细菌进行纯化，将纯化后的细菌移至2结果与分析NB培养基斜面上4℃保存J．根据各菌株菌落的2．1细菌分离结果形态、颜色、大小、透明度等对菌落进行分类，再用全沿线虫爬行踪迹得到大量细菌菌落．从松材自动细菌鉴定仪对主要细菌进行鉴定．线虫体上平均每条线虫分离得到288个菌落，根1．3

8、细菌培养原液的毒性测定据茵落形态、大小、颜色等培养性状将其分为两1．3．1细菌产毒培养将在NB斜面上保存的供种，分别编号为菌株D和O．菌株D，占菌落总数试细菌用接种环挑取菌苔溶于少量无菌水中制成的80％；菌落圆形，淡黄色，微隆起，边缘光滑，半细菌悬浮液，调节到所需浓度，然后再吸取一定量透明，粘度小；经菌落形态、革兰氏染色、氧化酶反的菌悬液接种到40mLNB液体培养基中．每40应等测定后，采用API2