无菌松材线虫对10年生黑松致病性的研究

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1、第!"卷第#$期林业科学./01!"，*/1#$"$$%年#$月&’()*+(,&(-.,)&(*(’,)2345，"$$%!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!无菌松材线虫对#$年生黑松致病性的研究#，"""池树友韩正敏何月秋（#1宁波市森林病虫防治检疫站宁波6#7$#$；"1南京林业大学森林资源与环境学院南京"#$$68）摘要："$$#年9月，用无菌的松材线虫对#$年生黑松进行接种。"$$"年:月，检查黑松发病情况，并对接种

2、的松树进行线虫和细菌的再分离。试验发现：接种的:株黑松##个月后仍有7株表现正常，没有出现任何症状，而从其木质部却能分离到数量较多的无菌松材线虫。结果说明：无菌的松材线虫虽然能侵入松树木质部，但在不携带细菌的情况下对松树是没有致病力的。关键词：无菌；松材线虫；黑松；接种；致病性中图分类号：&8%61##文献标识码：,文章编号：#$$#;8!::（"$$%）#$;$$8#;$6!"#$%&’()"*&+,"*(-&)%.%"/(0123&,4’56$76,.8+%)&9)(.#6,"&$:%"*;’&<"%.+%)&=(

3、($>&?,"($&#，"""’<=&<>?/>@ABCDH=>（#1!"#$%&’$%&(")&#"*+),-.+#+)&/)$0&+&/")"12/)34"2/)34"6#7$#$；"1("**$3$"1!"#$%&5$%".#6$%+),7)8/#")9$)&，2+):/)3!"#$%&#;<)/8$#%/&;2+):/)3"#$$68）;@’"4,."：#$I?DAJI/0KL0A3MN=BDOPDJD=B/3>0A4DKP=4

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6、菌在松材线虫病中的致病作用以来，很多学者对松材线虫病的真正致病原因进行了大量的试验。曹越等（#99%）首先提出了松材线虫不能产生致萎毒性物质。随后，赵博光等（"$$$）、谈家金等（"$$#）、洪英娣等（"$$6）和@AB等（"$$6）进行了大量的接种试验，证明了无菌松材线虫对黑松（’/).%&?.)4$#3//）愈伤组织及无菌苗并没有致病作用，只有当无菌松材线虫与致病细菌混合接种时，才能对愈伤组织及无菌苗产生致病力。据此，提出了松材线虫病真正的病原是松材线虫携带的致病细菌。虽然利用愈伤组织和尚未完全木质化的松树幼苗在一

7、定程度上可以反映松材线虫的致病性，但在自然界松材线虫病危害的均是完全木质化的多年生大树，所以要真正反映无菌松材线虫的致病性，必须要在完全木质化的大树上进行检验。本次试验在野外采用相对无菌的接种方法，测定了无菌松材线虫对#$年生黑松的致病性。#材料与方法1B1松材线虫的分离、无菌化处理与培养松材线虫来源于南京市铁心桥镇自然感病死亡的#7W"$年生的马尾松（’/).%9+%%")/+)+）。分离到的松材线虫经纯化以后，先经体积比为6X的@2处理7F=B，无菌水换洗6次，再用体积比为$1$7X的硫酸链""霉素和硫酸庆大霉素（

8、南京制药厂）混合液处理7W%次，每次处理7F=B，不断振荡，避免线虫沉入离心管底部，使抗菌素与线虫充分混合。每次处理后均用无菌水换洗6次，处理后的线虫经*L培养基平板检验确系无菌后，在超净工作台上于解剖镜下挑取雌、雄成虫各#$条，放在黑松愈伤组织上，"7Y黑暗培养，后一直在黑松愈伤组织上继代培养。接种时用无菌水将线虫洗下，调节线虫