DNA条形码技术对杏仁、核桃饮料掺假鉴别的研究

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1、硕士学位（毕业）论文DNA条形码技术对杏仁、核桃饮料掺假鉴别的研究学位申请人：韩晴指导教师：张志胜教授周巍高级工程师学科专业：食品科学学位类别：工学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三日分类号：TS255.6单位代码：10086密级：公开学号：20152070096DNA条形码技术对杏仁、核桃饮料掺假鉴别的研究StudyofDNABarcodingfortheAdulterationofAlmondBeveragesandWalnutBeverages学位申请人：韩晴指导教师：张志胜教授周巍高级工程师学科专业：

2、食品科学学位类别：工学硕士授予单位：河北农业大学答辩日期：二〇一八年六月三日摘要杏仁、核桃饮料作为深加工食品，无法直观辨别其组成成分，一些不法商家在利益的催化下掺假造假，从而侵害消费者的利益。针对这一现状，本研究建立一种关于杏仁、核桃饮料掺假的检测方法。试验基于DNA条形码技术对杏仁、核桃饮料中植物源性成分及常见掺假成分进行检测并用于市售样品。主要试验结果如下：1、以核桃、杏仁、花生、芝麻、大豆、榛子为试验材料，通过提取这些原材料的基因组DNA进行试验，从而初步确定通用引物。根据标准采用实时荧光PCR技术对六类物种的基因组DN

3、A进行检测，六类物种Ct值均符合标准要求，阴性对照和空白对照的扩增曲线均无起跳，各物种间不存在交叉污染。试验共涉及20对通用引物，其中13对来自文献参考、7对来自自行设计。各物种基因组DNA与各通用引物进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳检测，测序并比对，从而初步确定通用引物ITS1-3、ITS2-1、ITS2-2、rbcL-2、rbcL-5、matK-5、matK-7、trnH-psbA-1，可用于后续试验。2、设计掺假模型检测掺假物种，从而确定通用引物。以六个物种原材料为试验材料，通过分别定量提取其基因组DNA，建立基因组

4、DNA水平与原材料水平间的关系。试验中共设计四个掺假模型，分别为杏仁掺花生、杏仁掺大豆、核桃掺花生、核桃掺大豆，由初步确定的通用引物分别与掺假模型中的各个比例的混合基因组DNA进行PCR扩增，对产物进行测序及比对。通用引物ITS2-1和trnH-psbA-1结合可作为杏仁掺花生模型和杏仁掺大豆模型的检测，用于杏仁饮料掺假的检测；通用引物rbcL-5和matK-7结合可作为核桃掺花生模型和核桃掺大豆模型的检测，用于核桃饮料掺假的检测。3、以市售杏仁、核桃饮料为试验材料，由筛选出的通用引物进行试验。基于实时荧光PCR技术以18Sr

5、RNA作为内参基因对被测样品基因组DNA进行检测，各样品均出现典型的扩增曲线，说明基因组DNA提取成功。以其为反应模板，与筛选确定的通用引物进行试验，共对36个品牌70个批次的市售样品进行检测。由通用引物ITS2-1和trnH-psbA-1检测17个品牌40个批次杏仁饮料，其中有3个批次检出花生源性成分、2个批次检出大豆源性成分；通用引物matK-7和rbcL-5检测19个品牌30个批次核桃饮料，发现其中有5个批次检出花生源性成分、1个批次检出大豆源性成分。本研究针对市售杏仁、核桃饮料存在掺假情况，通过使用DNA条形码技术进行

6、研究。该研究拓宽了DNA条形码技术的研究领域，同时为该类食品检测提供了理论参考。关键词：DNA条形码；通用引物；植物蛋白饮料；掺假；检测StudyofDNABarcodingfortheAdulterationofAlmondBeveragesandWalnutBeveragesAuthor:QingHanSupervisor:ZhishengZhangMajor:FoodScienceAbstractAlmondbeveragesandwalnutbeveragesasdeep-processedfoodscannotbev

7、isuallyidentifiedastheirconstituents.Someunscrupulousmerchantswereadulteratingunderthecatalysisofintereststoinfringeupontheinterestsofconsumers.Inviewofthissituation,amethodfordetectingadulterationofalmondbeveragesandwalnutbeverageswereestablished.Thisexperimentwasb

8、asedontheDNAbarcodetechnologytodetectplant-derivedingredientsandcommonadulterantsinalmondbeveragesandwalnutbeveragesandappliedtothetestofc