SNT2524.1-2010进出口食品中变形杆菌检测方法定性检测方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２５２４．１—２０１０进出口食品中变形杆菌检测方法第１部分：定性检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犘狉狅狋犲犲犪犲狊狆犲犮犻犲狊犻狀犳狅狅犱犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋—犘犪狉狋１：犙狌犪犾犻狋犪狋犻狏犲犿犲狋犺狅犱２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２５２４．１—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２５２４《进出口食品中变形杆菌检测方法》分为两部分：———第１部分：定性检测方法；———第２部分：ＭＰＮ方法。本部分为ＳＮ／

2、Ｔ２５２４的第１部分。本部分的附录Ａ为规范性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中华人民共和国江苏出入境检验检疫局、中华人民共和国厦门出入境检验检疫局。本部分主要起草人：蒋鲁岩、郭桂萍、陈双雅、徐邦兴、高洁湘、蒋原、薛峰、祝长青、陈国强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２５２４．１—２０１０进出口食品中变形杆菌检测方法第１部分：定性检测方法１范围ＳＮ／Ｔ２５２４的本部分规定了乳与乳制品、肉与肉制品、水产品、蔬菜、蛋制品等５大类食

3、品中变形杆菌的检测方法。本部分适用于食品中普通变形杆菌、奇异变形杆菌、摩根摩根氏菌、产碱普罗菲登斯菌的检测。２规范性引用文件下列文件中的条款通过ＳＮ／Ｔ２５２４的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。ＳＮ／Ｔ１５３８．１培养基制备指南第１部分：实验室培养基制备质量保证通则ＳＮ／Ｔ１５３８．２培养基制备指南第２部分：培养基性能测试实

4、用指南３定义下列术语和定义适用于ＳＮ／Ｔ２５２４的本部分。３．１变形杆菌犘狉狅狋犲狌狊变形杆菌簇（Ｐｒｏｔｅｅａｅ）的细菌统称为变形杆菌。它们是有动力的革兰氏阴性杆菌，分为三个独立的菌属，即变形杆菌属、摩根氏菌属和普罗菲登斯菌。目前报道的引起食物中毒的变形杆菌有普通变形杆菌、奇异变形杆菌、产碱普罗菲登斯菌和摩根摩根氏菌。４设备与材料４．１冰箱：－２０℃～４℃。４．２恒温培养箱：３６℃±１℃。４．３天平：０ｇ～５００ｇ，感量０．５ｇ。４．４均质器。４．５均质袋。４．６灭菌三角烧瓶：５００ｍＬ，２５０ｍＬ。４．７灭菌培养皿：直

5、径９０ｃｍ。４．８显微镜：１０×～１００×。４．９灭菌刀、剪子、镊子。Ｔ、奇异变形杆菌ＡＴＣＣ２９９０６Ｔ、摩根摩根氏菌４．１０质控菌株：普通变形杆菌ＡＴＣＣ１３３１５Ｔ、产碱普罗威登斯菌ＡＴＣＣ９８８６Ｔ或类似菌株。ＡＴＣＣ２５８３０４．１１ＡＰＩ２０Ｅ肠杆菌和其他革兰氏阴性杆菌鉴定试剂盒或类似产品。４．１２ＶＩＴＥＫ全自动微生物分析系统或类似设备。１犛犖／犜２５２４．１—２０１０５培养基及试剂５．１肠杆菌增菌肉汤（ＥＥ肉汤）：见附录Ａ中第Ａ．１章。５．２革兰氏阴性菌增菌液（ＧＮ增菌液）：见附录Ａ中第Ａ．２章。５．３沙门

6、氏菌和志贺氏菌琼脂（ＳＳ琼脂）：见附录Ａ中第Ａ．３章。５．４伊红美兰琼脂（ＥＭＢ琼脂）：见附录Ａ中第Ａ．４章。５．５麦康凯琼脂（ＭＡＣ琼脂）：见附录Ａ中第Ａ．５章。５．６苯丙氨酸琼脂斜面：见附录Ａ中第Ａ．６章。５．７革兰氏染色液：见附录Ａ中第Ａ．７章。５．８培养基和试剂的配制遵循ＳＮ／Ｔ１５３８．１和ＳＮ／Ｔ１５３８．２的要求。６方法提要与流程６．１方法提要本方法采用增菌培养和分离鉴定的方法对变形杆菌进行定性检测。６．２检测流程检测流程图见图１。图１变形杆菌检测流程图２标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２

7、５２４．１—２０１０７检测步骤７．１前增菌称取２５ｇ（ｍＬ）样品，放入盛有２２５ｍＬＢＰＷ的无菌均质杯中，以８０００ｒ／ｍｉｎ～１００００ｒ／ｍｉｎ均质１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，或置于盛有２２５ｍＬＢＰＷ的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打１ｍｉｎ～２ｍｉｎ，若样品为液态，不需要均质，振荡均匀。如需要，测定ｐＨ值，用１ｍｏｌ／Ｌ无菌氢氧化钠或盐酸调ｐＨ值至６．８±０．２。无菌操作，将样品转至５００ｍＬ锥形瓶中，如使用均质袋，可直接进行培养，于３６℃±１℃培养８ｈ～１８ｈ。如为冷冻样品，应在４５℃以下不超过１５ｍｉｎ，或２℃～５℃不

8、超过１８ｈ解冻。７．２增菌轻轻摇动培养过的样品混合物，移取１ｍＬ，转种于１０ｍＬＧＮ增菌液或ＥＥ肉汤内，于３６℃±１℃培养１８ｈ～２４ｈ。７．３分离以接种环取增菌液一环，划线接种于ＥＭＢ琼脂平板和ＳＳ琼脂平板（或ＭＡＣ琼脂），于３６℃±１℃分别培养１８ｈ～２４ｈ。变形杆菌在ＥＭＢ琼脂上，菌落呈灰白色，圆