SNT2529-2010进出口食品中香港海鸥菌检测方法.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２５２９—２０１０进出口食品中香港海鸥菌检测方法犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犔犪狉犻犫犪犮狋犲狉犺狅狀犵犽狅狀犵犲狀狊犻狊犻狀犳狅狅犱狊犳狅狉犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局中华人民共和国出入境检验检疫行业标准进出口食品中香港海鸥菌检测方法ＳＮ／Ｔ２５２９—２０１０中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街１６号邮政编码：１０００４５网址ｗｗｗ．ｓｐｃ．ｎｅｔ．ｃｎ电话：６８５２３９４６６８５１７５

2、４８中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷开本８８０×１２３０１／１６印张０．７５字数１７千字２０１０年５月第一版２０１０年５月第一次印刷印数１—１６００书号：１５５０６６·２２０８６１定价１６．００元标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２５２９—２０１０前言本标准的附录Ａ、附录Ｂ为规范性的附录、附录Ｃ为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、广东出入境检验检疫局、杭州疾病预防控制中心。本标准主要起草人：李晓虹、韩伟、李志勇、倪晓平。本标准是首次发

3、布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ犛犖／犜２５２９—２０１０进出口食品中香港海鸥菌检测方法１范围本标准规定了进出口食品中香港海鸥菌的检验方法。本标准适用于淡水鱼中香港海鸥菌的检验。２规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。ＧＢ／Ｔ２７４０３实验室质量控制规范食品分子生物学检测ＧＢ／Ｔ２７４０５实验室质量控制规范

4、食品微生物检测ＳＮ／Ｔ１５３８．１培养基制备指南第１部分：实验室培养基制备质量保证通则ＳＮ／Ｔ１５３８．２培养基制备指南第２部分：培养基性能测试实用指南３定义和术语下列术语和定义适用于本标准。３．１香港海鸥菌犔犪狉犻犫犪犮狋犲狉犺狅狀犵犽狅狀犵犲狀狊犻狊，犔犎香港海鸥菌（犔犪狉犻犫犪犮狋犲狉犺狅狀犵犽狅狀犵犲狀狊犻狊，ＬＨ），为变形菌门（Ｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、β变形菌纲（Ｂｅｔａｐｒｏｔｅｏｂａｃｔｅｒｉａ）、奈瑟菌科（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｃｅａｅ）的一个新属。呈海鸥形或螺旋形杆状，兼性厌氧，不产芽孢，大小直径在０．５

5、ｍｍ～１ｍｍ之间的革兰氏阴性细菌。４设备和材料４．１恒温培养箱：３６℃±１℃。４．２吸管：１ｍＬ、５ｍＬ和１０ｍＬ，分刻度０．１ｍＬ。４．３接种环：直径３ｍｍ。４．４天平：感量０．１ｇ。４．５全自动细菌鉴定系统（ＶＩＴＥＫ或同类仪器）。４．６灭菌平皿：皿底直径９ｃｍ。４．７浊度仪：法国生物梅里埃公司或同类仪器。４．８ＰＣＲ扩增仪。４．９台式离心机：最高离心力１３０００ｒ／ｍｉｎ。４．１０恒温水浴锅：３６℃±１℃。４．１１均质器。４．１２微量可调移液器。１μＬ～１０μＬ，１００μＬ，２００μＬ，１０００μＬ。４．１３旋涡振荡器。４．

6、１４电泳仪。４．１５凝胶成像分析系统。４．１６微波炉。５培养基和试剂除另有规定外，所用试剂均为分析纯，试验用水和培养基配制应符合ＧＢ／Ｔ２７４０５和ＧＢ／Ｔ２７４０３１标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２５２９—２０１０的规定。５．１肠道菌增菌肉汤（ＥＥ肉汤）：见附录第Ａ．２章。５．２头孢哌酮麦康凯（ＣＭＡ）琼脂：见附录第Ａ．３章。５．３三糖铁琼脂（ＴＳＩ）：见附录第Ａ．４章。５．４胰化大豆胨蛋白胨肉汤（ＴＳＢ）：见附录第Ａ．５章。５．５绵羊头孢哌酮血平板：见附录第Ａ．６章。５．６２×犜犪狇ＰＣＲＭａｓｔｅｒＭｉ

7、ｘ［０．１Ｕ犜犪狇Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ／μＬ、５００μｍｏｌ／ＬｄＮＴＰｅａｃｈ、２０ｍｏｌ／ＬＴｒｉｓＨＣｌ（ｐＨ８．３）、１００ｍｏｌ／ＬＫＣｌ、３ｍｏｌ／ＬＭｇＣｌ２］。５．７ＰＣＲ引物见表１。表１香港海鸥菌引物序列及扩增片段长度引物名称引物序列（５’３’）扩增片段大小／ｂｐａＰ２ＦＴＴＧＡＧＧＧＴＧＣＣＣＧＡＡＡＧＧＧＡ４２４ｂＰ２ＲＣＴＡＣＣＣＡＣＴＴＣＴＧＧＣＧＧＡＴＴ５．８琼脂糖（电泳级）。５．９溴化乙锭。５．１０ＤＮＡ抽提试剂盒。５．１１ＤＮＡｍａｒｋｅｒ。５．１２常用生化试剂。５．１３ＴＡＥ电泳储备液（５０×

8、）：见附录第Ａ．７章。５．１４ＡＰＩ２０ＮＥ生化鉴定试剂盒或类似产品。注：ＡＰＩ２０ＮＥ是由法国生物梅里埃公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可www.bzfxw.com。如果其他等效产品具有相同的效果