SNT2497.2-2010进出口危险化学品安全试验方法空斑形成细胞(PFC)试验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．２—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２部分：空斑形成细胞（犘犉犆）试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋２：犘犾犪狇狌犲犳狅狉犿犻狀犵犮犲犾犾犪狊狊犪狔２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．２—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———

2、第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学

3、试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７的第２部分。本部分修改采用经济合作与发展组织（ＯＥＣＤ

4、）化学品测试指南ＮＯ．４９０《空斑形成细胞试验》，其有关技术内容与上述方法完全一致，在标准文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１—２０００做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李宁涛、王利兵、彭梓、张园、熊中强、张颖。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．２—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２部分：空斑形成细胞（犘犉犆）试验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分规定了进出口危险化学品安全试验方法空斑

5、形成细胞试验的试验原理、试验材料、试验程序和试验结果。本部分适用于检测进出口危险化学品经一次或反复多次接触受试物后，对试验动物体液免疫功能的影响。２术语和定义下列术语和定义适用于本部分。２．１空斑形成细胞试验狆犾犪狇狌犲犳狅狉犿犻狀犵犮犲犾犾犪狊狊犪狔体外检测和计数产生ＩｇＭ、ＩｇＧ等Ｉｇ抗体形成细胞的一种方法，把含有空斑形成细胞悬液与羊红细胞悬液混合，将其均匀地悬于半固体琼脂培养基或液体培养基中，在补体的参与下，在红色背景上可见到透明区，即是抗羊红细胞ＩｇＭ空斑形成细胞。２．２体液免疫犺狌犿狅狉犪犾犻犿犿狌狀犻狋狔Ｂ淋巴细胞在抗原的刺激下，增殖分化成浆细胞，浆细胞产生并分泌抗原特异

6、性抗体的过程。３试验原理空斑形成细胞试验（简称ＰＦＣ试验），是检测和计数产生ＩｇＭ、ＩｇＧ等Ｉｇ空斑形成细胞的一种方法，由于试验具有特异性高、筛检力强、不需要特殊的仪器设备等优点，故可作为判断外源化学物对机体体液免疫功能影响的指标。将经羊红细胞（ＳＲＢＣ）免疫４ｄ～５ｄ的小鼠脾脏制成单个细胞悬液，在半固体琼脂凝胶介质中与ＳＲＢＣ混合，在平皿或玻片上铺成薄层，置３７℃温育，在有补体参与下，使分泌抗体的淋巴细胞致敏周围的ＳＲＢＣ产生溶血反应，在其周围形成一个肉眼可见的透明溶血区，称为溶血斑。该方法检出的细胞主要是ＩｇＭ空斑形成细胞。为检测分泌抗羊红细胞的ＩｇＧ抗体形成细胞，需要加入抗Ｉｇ

7、Ｇ的抗体，以使羊红细胞在加入补体后溶解。４材料及试剂———Ｈａｎｋｓ液、ＳＡ缓冲液；———新鲜羊红细胞；———豚鼠血清；———琼脂糖（凝固点４２℃）；———清洁玻片；———试管；———平皿；———不锈钢筛网；１犛犖／犜２４９７．２—２０１０———微量取样器；———恒温水浴箱；———温箱；———有凹槽的玻片架。５试验程序５．１试验动物５．１．１选择健康成年小鼠，常用昆明、ＬＡＣＡ、ＢＡＬＢ／Ｃ等品系，雌性与雄性动物均可，鼠龄在６周龄～８周龄。５．１．２动物室