SNT2497.26-2010进出口危险化学品安全试验方法巨噬细胞功能试验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．２６—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２６部分：巨噬细胞功能试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋２６：犇犲狋犲狉犿犻狀犪狋犻狅狀狅犳犿犪犮狉狅狆犺犪犵犲犳狌狀犮狋犻狅狀２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．２６—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（Ｐ

2、ＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺

3、乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第２６部分。本部分修改采用《免

4、疫学实验技术》中的免疫毒理学研究方法，其有关技术内容与上述方法完全一致，在部分文本格式上按ＧＢ／Ｔ１．１做了编辑性修改。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：李晶、王利兵、王华、冯智劼、于智睿、李学洋。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．２６—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第２６部分：巨噬细胞功能试验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７．２６的本部分规定了进出口危险化学品安全试验中巨噬细胞功能试验的试验原理、

5、试验方法和试验结果。本部分适用于检测进出口危险化学品的免疫毒性的巨噬细胞功能试验。２规范性引用文件下列文件中的条款通过ＳＮ／Ｔ２４９７．２６的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本部分。ＧＢ１４９２４．１实验动物配合饲料通用质量标准ＧＢ１４９２５实验动物环境及设施３试验原理巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用

6、。巨噬细胞受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。４试验方法４．１试验动物ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠、ＩＣＲ、昆明品系小鼠，雌或雄，２０ｇ～２２ｇ。试验动物饲养条件应符合ＧＢ１４９２４．１和ＧＢ１４９２５的有关规定。４．２试剂４．２．１白色念珠菌悬液：接种于沙氏培养基的白色念珠菌，２８℃培养１８ｈ～２４ｈ，生理盐水洗，配成７个／ｍＬ细胞悬液。１×１０４．２．２６％无菌淀粉。４．２．３Ｈａｎｋ’ｓ液（含５％小牛血清）。４．２．４０．０３％美兰（４℃存放）。４．３试验步骤４．３．１体内法试验前３天，小白鼠腹腔注射６％无菌淀粉液１ｍＬ，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。试验时，每只小鼠腹腔注射白色念珠菌菌液

7、１ｍＬ，轻揉腹部，使菌液在腹腔中分布均匀，利于吞噬。３０ｍｉｎ后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用接种环取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴０．０３％冷美兰，盖上盖玻片。高倍镜下进行观察，计数。４．３．２体外法将６％的消毒淀粉液１ｍＬ注入小鼠腹腔。７２ｈ后，拉颈处死小鼠，剖腹，吸取腹腔液，１０００ｒ／ｍｉｎ１犛犖／犜２４９７．２６—２０１０离心５ｍｉｎ，收集巨噬细胞。以Ｈａｎｋ’ｓ液洗涤，１０００ｒ／ｍｉｎ离心５ｍｉｎ，重复