SNT2497.12-2010进出口危险化学品安全试验方法单细胞凝胶电泳分析试验.pdf

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1、中华人民共和国出入境检验检疫行业标准犛犖／犜２４９７．１２—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验犜犲狊狋犿犲狋犺狅犱狅犳犻犿狆狅狉狋犪狀犱犲狓狆狅狉狋犱犪狀犵犲狉狅狌狊犮犺犲犿犻犮犪犾狊—犘犪狉狋１２：犛犻狀犵犾犲犮犲犾犾犵犲犾犲犾犲犮狋狉狅狆犺狅狉犲狊犻狊（犛犆犌犈）犪狊狊犪狔２０１００３０２发布２０１００９１６实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局犛犖／犜２４９７．１２—２０１０前言ＳＮ／Ｔ２４９７《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为２９部分：———第１部分：体内哺乳动物肝细胞

2、程序外ＤＮＡ合成（ＵＤＳ）试验；———第２部分：空斑形成细胞（ＰＦＣ）试验；———第３部分：大型溞繁殖试验；———第４部分：酿酒酵母有丝分裂重组试验；———第５部分：睾丸细胞ＵＤＳ试验；———第６部分：哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验；———第７部分：小鼠耳肿胀试验；———第８部分：腘窝淋巴结试验；———第９部分：血清溶血素测定试验；———第１０部分：Ｔ淋巴细胞增殖功能测定试验；———第１１部分：种系突变试验；———第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验；———第１３部分：荧光原位杂交试验；———第１４部分：ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳试验

3、；———第１５部分：ＰＣＲＳＳＣＰ实验；———第１６部分：ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第１７部分：哺乳动物行为毒理学试验；———第１８部分：ＤＮＡ加合物的检测方法；———第１９部分：ＮｏｒｔｈｅｒｎＢｌｏｔ实验；———第２０部分：Ｂｒａｄｆｏｒｄ法测定蛋白质含量；———第２１部分：琼脂糖凝胶电泳试验；———第２２部分：ＤＮＡ的Ｔｍ值测定方法；———第２３部分：细胞器的分离实验方法；———第２４部分：细胞免疫功能体外检测方法；———第２５部分：体液免疫功能试验；———第２６部分：巨噬细胞功能试验；———第２７部分：流式细胞术检测凋亡

4、；———第２８部分：穿梭质粒在突变检验中的应用；———第２９部分：生化需氧量（ＢＯＤ）测定。本部分为ＳＮ／Ｔ２４９７系列标准的第１２部分。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位：中华人民共和国天津出入境检验检疫局、中华人民共和国湖南出入境检验检疫局。本部分主要起草人：张园、王利兵、王华、赵琢、韩伟、熊中强。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。Ⅰ标准分享网www.bzfxw.com免费下载犛犖／犜２４９７．１２—２０１０进出口危险化学品安全试验方法第１２部分：单细胞凝胶电泳分析试验１范围ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分

5、规定了进出口危险化学品的单细胞凝胶电泳分析试验的试验方法、试验步骤、试验结果和结果报告。本部分适用于进出口危险化学品单细胞凝胶电泳分析试验。２规范性引用文件下列文件中的条款通过ＳＮ／Ｔ２４９７的本部分的引用而成为本部分的条款。凡是注日期的文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本部分，然而，鼓励根据本部分达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的文件，其最新版本适用于本部分。ＧＢ１４９２４．１实验动物配合饲料通用质量标准ＧＢ１４９２５实验动物环境及实施３术语、定义和缩略语３．１术语和定义下列术语和定

6、义适用于本部分。３．１．１裂解犾狔狊犻狊采用高盐和去垢剂破除细胞膜，去除蛋白，是ＤＮＡ片段在电场力的作用下能够从细胞核迁出。３．１．２解旋狌狀狑犻狀犱犻狀犵ＤＮＡ为双螺旋结构，在解旋液的作用下，双链ＤＮＡ变性，成为单链。３．２缩略语下列缩略语适用于本部分。３．２．１犇犕犛犗犇犻犿犲狋犺狔犾狊狌犾犳狅狓犻犱犲二甲基亚砜３．２．２犇犖犃犇犲狅狓狔狉犻犫狅狀狌犮犾犲犻犮犪犮犻犱脱氧核糖核酸３．２．３犈犅犈狋犺犻犱犻狌犿犫狉狅犿犻犱犲溴化乙锭３．２．４犘犅犛磷酸盐缓冲液３．２．５犘犐犘狉狅狆犻犱犻狌犿犻狅犱犻犱犲碘化丙啶４原理ＤＮＡ分子在断裂剂作用

7、下出现链断裂，将单个核细胞包埋于琼脂糖凝胶中，细胞经裂解和解旋后１犛犖／犜２４９７．１２—２０１０电泳，在电场作用下，ＤＮＡ片断向阳极迁移，移动的距离与ＤＮＡ片断的相对分子质量和电荷数相关，经荧光染料染色后在荧光显微镜下可观察到彗星样图像，根据慧星拖尾长度及荧光强度可进行ＤＮＡ损伤分析。５主要试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯，实验用水为灭菌去离子水或超纯水。５．１ＰＢＳ：在８００ｍＬ蒸馏水中溶解８ｇＮａＣｌ，０．２ｇＫＣｌ，１．４４ｇＮａ２ＨＰＯ４和０．２４ｇＫＨ２ＰＯ４，用ＨＣｌ调节溶液的ｐＨ值至７．４，加水定容至１Ｌ，在１．０

8、３４×１０５Ｐａ（１５１ｂｆ／ｉｎ２）高压下灭菌２０ｍｉｎ，保存于室温０．７％正常熔点凝胶（ＰＢＳ配制）。５．２０．７％低熔点凝胶（ＰＢＳ配制）。５．３１％正常熔点凝胶（ＰＢＳ配