多硫酸化硫酸软骨素的制备、性质及其口服制剂对兔膝骨关节炎的关节保护作用

《多硫酸化硫酸软骨素的制备、性质及其口服制剂对兔膝骨关节炎的关节保护作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、山东大学硕士学位论文多硫酸化硫酸软骨素的制备、性质及其口服制剂对兔膝骨关节炎的关节保护作用姓名：袁实申请学位级别：硕士专业：微生物与生化药学指导教师：姬胜利;臧恒昌20080508山东大学硕士学位论文CSCSACSCPSCSOAMMPsTNF．qIL—lpELISAGlcUAGalNAc符号说明硫酸软骨素4．硫酸软骨素6．硫酸软骨素多硫酸化硫酸软骨素骨关节炎基质金属蛋白酶肿瘤坏死因子a白介素lp酶联免疫吸附试验葡萄糖醛酸N．乙酰氨基半乳糖原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明

2、引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。论文作者签名：盔宝日期：趔羔星关于学位论文使用授权的声明本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。(保密论文在解密后应遵守此规定)论文作者签名：．懿导师签)一n{

3、制V—_，山东大学硕士学位论文多硫酸化硫酸软骨素的制备、性质及其口服制剂对兔膝骨关节炎的关节保护作用研究生袁实导师姬胜利臧恒昌摘要随着世界人口进入老龄化，骨关节炎(Osteoarthritis，OA)的患病率不断上升，患病人群日益增多。OA会导致疼痛、残疾，严重影响患者的劳动能力。OA发生时，首先受到损伤的是关节软骨。关节软骨变薄、变性、破坏，软骨下骨硬化、关节间隙狭窄。对OA的治疗目前常用非甾体类抗炎药和多糖类软骨保护剂。多糖类软骨保护剂一般都是肝素类似物，如多硫酸氨基聚糖、多硫酸戊糖钠、多硫酸糖胺聚糖等。它们的作用是维持关节软骨的蛋白多

4、糖含量，刺激软骨细胞合成1I型胶原及蛋白多糖，从而有助于维持关节软骨完整性。硫酸软骨素(Chondroitinsulfate，CS)是关节软骨的重要成分，是由重复双糖_4)．p．D．GIcUA．(1_3)⋯13DGalNAc一(1一构成的糖胺聚糖。OA发生时，软骨受到损害，CS含量下降。补充CS能有效缓解症状，减轻炎症区域的肿胀度、下调基质金属蛋白酶．9，减轻OA对软骨的损害；还可能降低发病率、关节温度、痛感。临床上已有CS的复方口服药物或膳食补充剂，用于骨关节炎患者的治疗和保健。而深入研究发现，CS由于糖链上硫酸基位置的不同具有多种异构体

5、。目前使用的CS药物多从动物软骨组织提取，其成分多是4．硫酸软骨素(CSA)和6．硫酸软骨素(csc)。而在人关节软骨中主要含有的是4，6．二硫酸软骨素(CSE)。体外实验发现，当模拟OA发生时，培养的软骨组织中4，6．双硫酸软骨素含量下降，而有针对性的补充4，6一双硫酸软骨素在低浓度即可刺激软骨基质合成，并抑制蛋白酶合成，具有显著的软骨保护效应。提示硫酸根和其负电荷可能对OA的发病和治疗都非常重要。为开发针对OA发病机制的特异性的软骨保护剂，本课题采用氯磺酸．甲酰胺磺化法对4．硫酸软骨素进行多硫酸化衍生，制备了含有4,6．双硫酸软骨素结构

6、9山东大学硕士学位论文的多硫酸化硫酸软骨素(Polysulfatedchondroitinsulfate，PSCS)，使硫酸软骨素带上更多的负电荷，改变了其构象。由于PSCS是带有大量负电荷的大分子，口服不易吸收，要开发成口服治疗OA的药物，需要制备成带负电荷少、容易吸收的口服制剂。因此我们研究了PSCS的制备、鉴定、剂型及对兔膝OA的药理活性。1I'SCS的制备、纯化及性质用氯磺酸一甲酰胺磺化法对cs进行多硫酸化，制备PSCS。通过so：一含量测定和sol一／C00。比值测定验证磺化结果，so：一含量从12．76％上升到20．62％，增加

7、了7．76％；S02,-／COO-比值从1．35上升到3．35。产率达78．9％。对产物PSCS进行毛细管电泳分析和高效液相色谱分析，均只出现一个对称尖峰，证明所得产品较纯。并测定了其理化性质，包括糖醛酸含量、氨基己糖含量、绝对分子量、比旋度等。同时测定了PSCS的抗凝效价为40usp／mg。说明PSCS具有一定的抗凝活性。2PSCS的结构研究用UV、111、1H-NMR和13C-NMR分析了PSCS的结构。Uv显示，样品不含共轭双键，也不含有蛋白质和核酸等杂质。经与CS红外光谱对比，证实了PSCS具有CS基本母链结构，即含有葡萄糖醛酸与半

8、乳糖胺双糖单位，吡喃糖为D构型。并且在PSCS的诹上出现了硫酸基加在了半乳糖胺6位碳上的特征吸收峰818cm"1，可以判断半乳糖胺6位碳上羟基被硫酸基取代。经过1H-NMR和”C