冲击波对肌腱修复及其相关生长因子表达的影响

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1、河北医科大学硕士学位论文冲击波对肌腱修复及其相关生长因子表达的影响姓名：李志国申请学位级别：硕士专业：外科学指导教师：邢更彦20090301中文摘要冲击波对肌腱修复及其相关生长因子表达的影响摘要目的：肌腱损伤(tendoninjury,TI)是骨科和运动医学中常见多发疾病，近年来其发病率有逐步上升的趋势。因此，其修复过程中如何促进愈合、功能恢复等一系列亟待解决的问题就格外引人注目。在以往所进行的研究中，生长因子对包括肌腱在内的多种组织损伤后的修复均有一定的促进作用，但是对肌腱的研究多集中在体外腱细胞的培养和分化上，至于动物在体实验研究中生长因子的表达规律及作用则较少涉及。体

2、外冲击波(extracorporealshockwave，ESW)于上世纪90年代开始应用于治疗骨不连，骨折延迟愈合和慢性软组织疾病，已取得明显的疗效，由此演变产生体外冲击波疗法(extracorporealshockwavetherapy,ESWT)。目前国内有关ESWT的研究和临床应用主要集中在两个方面：①骨组织疾病——促进成骨作用，如治疗骨折骨不连接、延迟愈合和治疗股骨头缺血性坏死；②软组织慢性损伤性疾病——抗炎作用，如治疗肱骨外上髁炎，足底筋膜炎和肩关节钙化性肌腱炎等顽固性骨肌病变。而国外，OrhanZ、KershKD等试验性的应用体外冲击波干预动物在体肌腱促进其恢

3、复已取得_定效果，但冲击波对肌腱愈合过程中肌腱内、外生长因子表达的影响以及与肌腱愈合相关性的研究还是空白。因此，应用体外冲击波对动物在体肌腱愈合影响的机制有待进一步研究。本实验通过动物在体损伤肌腱应用体外冲击波干预后，对组织学观察及相关生长因子女lJTGF．13l、bFGF、中文摘要VEGF、PDGF和IGF．1以及I型胶原等含量的检测，阐述冲击波对肌腱愈合过程中相关生长因子表达的影响，以期为在体肌腱的基础研究和临床应用提供理论依据，从而达到指导临床治疗的目的。方法：选择健康的成年新西兰大耳兔45只，体重2．0～2．5kg，雌雄不限。动物由解放军总医院动物实验室提供，并采用

4、标准颗粒饲料笼中喂养。将所有兔子随机分为术前、3天、7天、2周、3周、4周、6周、8周八个组，每组5只兔子，每只兔子的左后肢为对照组，右后肢为实验组。剩余5只为备用，以备实验过程中动物手术失败、伤口感染或意外死亡所消耗。无菌条件下从术前组5只兔子双后肢取跟腱组织进行大体观察、组织学观察和相关生长因子TGF．B1、bFGF、VEGF、PDGF和IGF．1以及I型胶原等含量的检测。将另外40只兔子制作成肌腱损伤的模型。实验组使用瑞士EMS公司Dobrclast放射冲击波治疗机在手术完成后第一天给予冲击波干预，冲击波能流密度为0．16mJ／mm2,冲击量为500次(4Hz，3．5

5、kPa)。干预后放回笼中自由活动。对照组不做处理。依照动物分组，分别于术后3、7、14、21、28、42、56天取材。动物麻醉后，立即沿原切口逐层切开，直至暴露跟腱，准确定位原肌腱修复位置，进行大体观察，无菌条件下切取跟腱前次手术切口两端各O．5cm长的跟腱组织，光镜下行组织学观察，并采用双抗夹心ELISA法进行相关生长因子TGF一13l、bFGF、VEGF、PDGF和IGF．1以及I型胶原等含量的检测。最后采用麻醉过量的方法将兔子处死。对上述各部分实验数据进行整理，各组数据均以均数4-标准差(z土s)中文摘要表示，两组间均数比较采用两样本t检验，设定P<0．05为有统计学

6、意义，运用SPSS16．0统计软件进行数据分析。结果：1肌腱的活体大体观察：对照组修复过程与正常修复过程相符，实验组肌腱修复各个过程在各相应时间点上较对照组提前l~2周，证实体外冲击波治疗可促进肌腱修复；实验组较对照组出现粘连早，但程度轻，且后期肌腱活动度比实验组大，说明实验组肌腱可能通过提前愈合后早期活动减少了粘连的发生。2组织学观察(HE染色和Masson染色)：对照组各时间切片符合正常肌腱修复过程，实验组各个时间点在时间上均较对照组出现早1～2周，这一点与大体观察亦相符，同样证实冲击波治疗能够促进肌腱愈合，而且可以通过早期活动间接减少粘连的发生。3相关生长因子和胶原的

7、检测：(1)TGF．131在肌腱修复中的表达本实验显示对照组肌腱在损伤后3天、7天、2周时相点，TGF．131的表达迅速增高，至2周时达到最高点，随后表达即明显减少，至3周时降至术后3天时水平，之后逐渐下降，直至试验结束(8周)时仍保持一定水平的表达；实验组经冲击波干预后，TGF—pl的表达在术后的3天、7天时明显增加，并在7天时达到高峰，随后即迅速降低，至4周后与对照组表达无明显差异；实验说明，TGF．p。的表达贯穿于肌腱修复的全过程，但高度表达主要发生在早、中期；冲击波的干预使TGF．p，的表达提前1周达到高峰