ⅰ、ⅲ型胶原，双糖链蛋白多糖和核心蛋白聚糖在发育性髋脱位关节囊及圆韧带的表达

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1、中国医科大学博士学位论文Ⅰ、Ⅲ型胶原，双糖链蛋白多糖和核心蛋白聚糖在发育性髋脱位关节囊及圆韧带的表达姓名：王恩波申请学位级别：博士专业：儿科学指导教师：赵群20070401中国医科大学研究生学位论文独创性声明本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果．据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意

2、。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任．论文作者签名：薹星遂毒日期：埋生!!中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学校可以公布学位论文的全部或部分内容(保密内容除外)，以采用影印、

3、缩印或其他手段保存论文。羹喜姜嘉萎耋i盎指导教师签名：名幽a日期：2疋．!g；!墨·中文论著摘要·I、Ⅲ型胶原，双糖链蛋白多糖和核心蛋白聚糖在发育性髋脱位关节囊及圆韧带的表达前言发育性髋关节发育不良(developmentaldisplysiaofthehip，DDH)是小儿骨科常见的髋关节发育障碍性疾病，发病率1．1．5‰，目前病因不明。以往的研究发现DDH患儿多伴有全身关节松弛，这与髋脱位术中所见松弛薄弱的髋关节囊与圆韧带相符。因此髋关节松弛是导致髋脱位主要因素之一也得到了普便认同。关节过度活动或关节松

4、弛目前认为是一种疾病并已得到儿科及骨科医师的重视，它可发生在单个关节或是全身性的。大多数学者认为它是由基因决定的结缔组织松弛所造成的，特别是对关节囊和韧带的影响。目前己知的3个经典的与基因有关的胶原疾病有；1)马凡氏综合症：是原纤维蛋白基因FIBl和FIB2的突变；2)成骨不全：有200多种独立突变发生在COLlal和COLIa2：3)Ehlers-Danlos综合症：约有80种突变发生在COL3al。因此有许多学者推测DDH可能是一种发生在结缔组织的可遗传的疾病，很可能与某些细胞外基质成分有关，如胶原、弹

5、力纤维等。人类出生时髋臼较浅，股骨头表面为平滑弧线，出生后髋臼不断加深，股骨头弧度加大，髋关节逐渐稳定，而这需要头臼同心的相互作用才能达到。而关节囊和圆韧带则具有保持这种头臼同心位置重要的作用。胶原纤维及小分子蛋白多糖是关节囊和圆韧带的主要成分，并发挥着重要的抗张力生物学作用。以往关于DDH关节囊及圆韧带中胶原纤维的研究有过少量报道但结果迥异，多停留在组织形态水平。本研究以DDH患儿髋关节囊和圆韧带为研究对象，应用免疫组织化学法观察I、Ⅲ型胶原在髋关节囊和圆韧带的分布与定位；应用分子生物学检测技术比较I、Ⅲ

6、型胶原和两种小分子蛋白多糖(Biglyean和Deco血)在转录水平和(或)蛋白水平的表达差异。试图从分子水平揭示DDH患儿髋关节松弛的机理，是关节松驰导致DDH理论的一次深入探索。材料与方法一、标本采集及处理发育性骰脱位髋关节囊标本33例，来源方式：手术复位中经紧缩后切除的髋关节上方多余关节囊。对照组儿童髋关节囊标本17例。在DDH组选择与对照组性别相同，年龄相近的9例患几与对照组配对。发育性髋脱位髋关节圆韧带标本20例，来源方式：手术复位中切除的患髋圆韧带。对照组儿童圆韧带标本10例。在DDH组选择与对

7、照组性别相同，年龄相近的6例患儿与对照组配对。剪取标本为多个小组织块：部分置于4％多聚甲醛溶液中室温固定24小时，脱水，透明，石蜡包埋，制成5tma切片；部分置于Eppendorf管中，一800C深低温保存。二、实验方法及检测指标(一)免疫组织化学法(SABC法)观察I、Ⅲ型胶原在DDH患儿髋关节囊及圆韧带中的定位与分布，半定量测定I、Ⅲ型胶原含量。(二)俄关节囊及圆韧带中I、Ⅲ型胶原和两种小分子蛋白多糖(Biglycan和Decorin)转录水平检测反转录聚合酶链反应(reversetranseripti

8、onpolymerasechainreaction，RT-PCR)测定COLlal、COL3al、Biglycan和DecorinmRNA水平表达。(--)髋关节囊及圆韧带中I、Ⅲ型胶原蛋白水平检测免疫印迹杂交技术(Western-Blot)检测COLIal、COL3al蛋白水平表达。三、统计学处理采用SPSSl0．0软件进行统计学分析，p