spio标记的微囊化bmmscs同种异体移植治疗兔椎间盘退变的实验研究

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1、东南大学硕士学位论文SPIO标记的微囊化bMMSCs同种异体移植治疗兔椎间盘退变的实验研究姓名:曹烨申请学位级别:硕士专业:外科学(骨科)指导教师:吴小涛20090603中文摘要SPIO标记的微囊化bMMSCs同种异体移植治疗兔椎间盘退变的实验研究研究生:曹烨导师:吴小涛目的:探讨超顺磁性氧化铁(superparamagneticironoxide,SPIO)磁粒子标记的微囊化骨髓间充质干细胞(bonemarrowmesenchymalstemcells,b删SCs)同种异体移植治疗椎间盘退变的可行性,并用磁共振进行干细胞示踪。方法:取同种异体兔b删SCs行体外培养,并在体

2、外纯化扩增,用超顺磁性氧化铁磁粒子标记后分别于l、3、5、7d用MTT法检测细胞活性。并将标记的干细胞行微囊化(microencapsulation),于退变手术当时植入手术节段椎间盘内。分别于2、4、6、8周用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化,免疫组化法测定II型胶原含量的变化,用MR扫描对标记干细胞在椎间盘内分布进行示踪。所得数据进行统计学处理。结果:MTT法结果显示SPIO对bMMSCs的生物活性没有影响。bMMSCs能被SPIO有效标记,运用MR扫描可观察到其在体内的分布,并发现干细胞向周边发生了迁徙。8周内微囊化细胞移植组髓核蛋白多糖和II型胶原的含量高于

3、未微囊组与模型组,未微囊组髓核蛋白多糖和II型胶原的含量也高于模型组,差异有统计学意义。结论:SPIO可以有效地标记干细胞并行体内活体示踪,且不影响细胞活性,是理想的示踪剂。单纯bMMSCs移植能恢复一定的细胞外基质,但治疗椎问盘退变的效果不及微囊化组。关键词:椎间盘退变;微囊化:骨髓间充质干细胞;超顺磁性氧化铁:同种异体移植英文摘要Anexperimentalresearch:MicroencapsulatedbMMSCsmarkedbySPIOallografttherapyforlumbarintervertebraldiscdegenerationAbstractO

4、bjective::ToinvestigatethefeasibilityofusingmicrocncapsulatedbMMSCsthatmarkedbySPIOallografltherapyforlumbarintervertchraldiscdegeneration.Methods:In1、3、5、7days,/nvitrocytotoxicitytest(MTTc栅omatometry)wasusedtovaluatethe(bMMSCs)’SactivitymatlabeledbySPIO.An伽vivomodelwasestablishedtoinvesti

5、gatethefeasibilityofmicrocncapsulatedbMMSCsthatculturedinvitroandmarkedbySPIO,andsurvivedindiscspace.In2,4'6,8weeks,immunohistochernicalstainingwasusedtodeterminethechangeofcollagentypeIIcontent;spectrophotometrytodeterminethechangeofamountofproteoglycanwithphlorglucin01.Magneticresonances

6、canningwasalsoperformedtotracetheimplantedcellsindiscs.Thedataisforstatisticalanalysis.Result:MTTchromatometryshowsthatSPIOdon’teffecttheactivityofbMMSCs.MRscanningcanobservethedistributionofbMMSCsindiscsthatmarkedbySPIO,andfindthatbMMSCsmovefromcentertosurrounding.MieroencapsulatedbMMSCsc

7、ouldmaintainviabilityandproliferateintherabbitintervertebraldisc.TheamountofproteoglycanandcollagentypeIIcontentoftheintervertebralinmatrixsynthesisinthemicroencapsulatedbMMSCsgroupwasincreasedin8weeks.Conclusion:SPIOisanidealtracerthatcaneffectivelymarkbMMSCs

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