硫酸软骨素和氨基葡萄糖制备及检测方法的研究

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1、V938G35工分类号密级单位代码：10019学号：S040712飞嚼差-f夭等学位论文硫酸软骨素和氨基葡萄糖制备及检测方法的研究StudyontheExtractionandAnalysisofChondroitinsulfateandGlucosamine研究生：．韭垡疆指导教帅：睦敛教援申请学位类别：王堂亟±专业领域名称：盒晶型堂研究方向：盒晶化堂所在学院：食品科堂生萱差王程堂院2006年6月摘要硫酸软骨素和氨基葡萄糖作为天然有机提取物，两者所具有的独特生物活性及功能，使其戍用范围逐步扩大，经济效益和社会效益迅速提高。加之其原料资源丰富，价廉易得，适于火规模制备，成为目前天然提取产物

2、的研究热点之一。本文以牛软骨和壳聚糖为原料，分别研究了硫酸软骨素和氨基葡萄糖的制备工艺及其检测方法。试验建立了牛软骨中硫酸软骨素蛋白酶酶解提取_L艺。采用四因素三水平中心组合旋转设计优化牛软骨中硫酸软骨素的酶法提取T艺条什为：水解温度55℃、pml、酶添加量25mg、14倍液料比的条件下水解7小时，硫酸软骨素得率为32．45％。试验建立了温和条件降解壳聚糖制备氨基葡萄糖的工艺。通过正交试验优化确定了果胶酶BE3．L降解壳聚糖的酶解作用条件为：料液比1：60，水解时间9h，温度50℃，酶添加量2．0mL。在酶解壳聚糖基础上，调整酶解液酸浓度为6mol／L，70℃加热水解制备氨基葡萄糖，建立了

3、较为温和的氨基葡萄糖制备工艺。试验分别建立了硫酸软骨素和氨基葡萄糖的检测方法。硫酸软骨素定量检测条件为：在浓度为8mol／L的盐酸下，沸水浴水解60min，显色15min。显色后在波长554nm处测定，结果表明：硫酸软骨素浓度在0．20--1．00mg／mL范围内线性关系良好，其回归方程为：A=0．631C+0．04，相关系数R2=o．9994。氨基葡萄糖定量检测条件为：60'12恒温水浴，氨基葡萄糖盐酸盐与盐酸吡哆醛缩和反应30min后，加入Zn2+60。C水浴络合30rain，衍生后在EX386nm，EM475nm处测定荧光强度，结果表明，氨基葡萄糖盐酸盐浓度在1．5～6．5ug／mL

4、范围内线性关系良好，其回归方程为：C=0．165354F+1．575686，拟合优度99．109％。氨基葡萄糖薄层定性展开条件为：正丙醇：水：氨水=12：4：2。关键词：硫酸软骨素，氨基葡萄糖，制备工艺，定量检测AbstractChondroitinsulfateandGlucosamineinsteadofmedicinegraduallyinmedicalcarearea．Theareaofapplicationisgraduallylarger,thebenefitsineconomyandsocietyincreasequickly,forbothofthemhavespecial

5、biologyactivityandfunction．ChondroitinsulfateandGlucosaminehavebeenoneofthehotspotsintheresearchofnaturalproductextractionalsobecauseofitsabundantmaterial，inexpensive，adapttopreparationcosmically．ThispaperstudiedthepreparationofChondroitinsulfateandGlucosamineseparatelyanditsailalysismethodsusingc

6、attlecartilageandChitosan．AmethodwasestablishedforthedeterminationoftheenzymehydrolysisconditionsofChondroitinsuffateincattlecartilage．Responsesurfacemethodology(RSM)wasusedtoevaluatetheeffectofallfactorstotheresults，aswellasusingCentralcompositerotatabledesign(CCRD)tooptimizethehydrolysisconditio

7、ns．Theresultshowedthattheoptimalconditionwas：thehydrolysistemperature55"{2，pilll，adding25mgenzyme，I-，S14：1，therateofoutput32．45％after7hattheabovecondition．Amethodwasestablishedforthedeterminationofpreparationcond