降解豆粕中抗原菌株的筛选及大豆肽制备的研究

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1、万方数据饲料检测降解豆粕中抗原菌株的筛选及大豆肽制备的研究肖永友王伦涓姜玉朱丽如蔡发国广州市博仕奥生化技术有限公司摘要通过对多种微生物降解豆粕中抗原和增加其小分子肽等能力的比较分析，筛选出效果较好的4种菌株，并研究它们混合培养对豆粕中抗原的降解作用。结果表明，在豆粕浓度为15％，接种量为5％(B一913：B一514：B一515：M一520为1：1：1：1)，培养温度为35℃，210r／min，pH自然的条件下发酵60h，豆粕中的抗原接近0，小肽含量高达36．9％，活菌总合量达2×1010CFU／mL。。关键词微生物豆粕大豆抗原小肽中图分类号：$816．

2、3文献标识码：B文章编号：1002—2813(2008)10—0037—03豆粕是目前饲料工业和畜牧养殖业使用量很大的一种优质蛋白源。与棉粕、菜粕和花生粕相比，豆粕具有氨基酸平衡(赖氨酸含量高，接近理想氨基酸模式)、消化率高及适口性好等特点。与动物源蛋白(如鱼粉、肉骨粉和血浆蛋白粉等)相比，豆粕具有货源充足，不易被病原菌污染或氧化腐败、含毒害物质概率低及安全系数高等特点。但豆粕中也含有一些抗营养因子，如胰蛋白酶抑制因子和球蛋白等，这些抗营养因子对幼龄动物特别是断奶仔猪的肠道结构具有很大的破坏作用，并引起仔猪腹泻等疾病。因此，为降低豆粕中的抗原等抗营养因

3、子及将其大分子蛋白降解成小分子肽，使动物能更好的吸收利用，相关人员做了大量研究工作，其中以酶解法效果较好，但成本相当高，并含有大量苦肽，后续工艺相当繁琐。而利用微生物发酵处理，通过微生物作用对某些苦味肽基团进行修饰和重组，使小肽之间和小肽与氨基酸间发生移接及重排。制得的大豆蛋白活性肽具有溶解性好、无苦味和异味、口感好、溶解黏度小和受热不凝固等优点，不仅克服了酶解法产品苦味大和口感差等缺点，而且大大降低了生产成本。研究旨在筛选出高效降解豆粕中抗原等抗营养因子的菌株，并运用生物发酵技术探索大豆肽制备收稿日期：2008—05—21的新途径，以期研发一种零抗原

4、，高生物活性肽含量的优质蛋白原料。1材料与方法1．1材料1)菌种真菌M一520，芽孢杆菌B一514，B一515，B一911，B一913，B一915，B一927，以上菌株均由这项试验的实验室保藏。2)原料豆粕。3)种子培养基真菌用PDA培养基，芽孢杆菌用牛肉膏蛋白胨培养基。4)发酵培养基15％的豆粕水溶液，pH自然。1．2方法1．2．1试验方法保存菌种3五5*rc养黼基培乏湍翼薹培篙蠢竺发酵培i养基35℃．210r／rain48h筛选菌株j检测篓袋瓣≥5囊嚣≯发酵培养基麓嚣嚣高妇株图I高效降解豆粕中抗原菌株的筛选及工艺条件优化的流程I．2．2分析方法I)

5、抗原含量测定SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS—PAGE)。2)小肽含量测定三氯乙酸沉淀法。3)粗蛋白质测定凯氏定氮法。饲料研究FEEDRI-：SF',LRCItNO，1o，2r耵837万方数据厅饲料检测4)菌含量血球计数板计算法。2结果与分析2．1高效降解豆粕中抗原及提高小肽的菌株的筛选2．1．1不同菌株对豆粕中抗原的影响将经活化和扩大培养后的各种菌液按5％的接种量分别接入发酵培养基中，于35oC，210r／min条件下培养48h，然后取样并检测。2．1．2各菌株对豆粕中抗原的降解取发酵后的的豆粕，用0．03mol／L，pH8．0的T_ris—HC

6、I缓冲液浸提，并加入巯基乙醇(0．01mol／L)，50℃恒温lh，离心分离(5000r／min，30IIlin)，取上清液(7S和1is)进行电泳分析(见图1)。图2经不同菌株发酵后豆粕中蛋白的SDS—PAGE电泳注：1．发酵菌株为B一911，2．发酵菌株为B一515，3．发酵菌株为B一514，4．发酵菌株为B一913，5．发酵菌株为B一927，6．发酵菌株为B一915，7．发酵菌株为M一520，8．未发酵的豆粕，9．标准蛋白质相对分子质量豆粕中的抗原主要有7s和11S，其中7s大豆球蛋白又主要含有a’(Mw一72ku)、a(Mw一68ku)和8(M

7、w一52ku)3个亚基，lls大豆球蛋白则主要含有酸性亚基A1a(Mw一38ku)、A1b(Mw一38ku)、A2(Mw一38ku)、A3(Mw一45ku)、A4(Mw一38ku)、&(Mw一11ku)和碱性亚基B(Mw一19ku)等。由图2可见，经各种菌株发酵后的豆粕中7S和1lS的含量情况，其中7种不同株菌对7s降解都较彻底，这可能是由于7S的相对分子质量较大，其含有的肽链形式较多，因此，各种株菌分泌的蛋白酶都能找到很好的切点，故这几种株菌都能很好的降解7s。但也可看到，各种菌对11s的降解程度差异较大，其中B一9ll和B一927对11s的降解相对

8、稍差，但较未发酵豆粕中的llS大豆球蛋白都有相对的减少，而且其电泳条带也呈连续状态，说明其中1