多酶复合水解微波加热制备小分子大豆肽

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1、第19卷第7期化学研究与应用Vof.19，No.72(X刀年7月ChemicalRese眼handA即hcationJuly，2(X)7文章编号:l0(抖一l656(2007)07切52~04多酶复合水解微波加热制备小分子大豆肤刘静‘，2，陈均志‘’，张海平‘，董文宾’(1.陕西科技大学化工学院，陕西西安，710021;2.咸阳师范学院化学系，陕西咸阳，712000)摘要:以水解度和AN为指标，确定了微波加热条件下，三种单酶(碱性蛋白酶、中性蛋白酶、酸性蛋白酶)水解大豆蛋白的最佳工艺条件及三种酶复合水解的加酶顺序，将大豆蛋白最大限度的分解为小分子大豆多肤和氨基酸。毛细管电泳实验表明:

2、多酶复合水解优于单酶。关键词:碱性蛋白酶;中性蛋白酶;酸性蛋白酶;水解;大豆多肤.中图分类号:0657，71文献标识码:A大豆蛋白以其营养价值高，来源丰富，倍受人1.1仪器与材料们青睐。但由于大多数蛋白质分子质量在10万大豆分离蛋白(新乡同飞食品有限公司，蛋白以上，结构复杂〔’〕，从而使得大豆蛋白消化率和生质含量)89%，含水量感7%，NSI值)85%);中性物效价不及牛奶和蛋等动物性蛋白。蛋白酶、碱性蛋白酶、酸性蛋白酶(经测定酶活力大豆蛋白经水解生成小分子肤后，其功能特分别为3.0欠104可9、3，sxlo4可9、1.6xl04叮9，点可明显改变。氨基酸组成几乎与大豆蛋白质相均为无

3、锡杰能科生物工程有限公司);多肤分子量同，必需氨基酸的平衡良好且含量丰富。与大豆标准品(毛细管电泳专用mershamBiosciences蛋白相比，小分子大豆肤具有很好溶解性、稳定Co.);其余试剂均为AR级。性、低粘度等，在体内消化吸收快，同时具有许多LG一微波炉(LG电子电器公司，经改造);微生理活性，如降血压，降胆固醇，抗疲劳等，因此大量凯氏定氮仪(上海分析仪器厂);ZD一2型自动豆多肤在食品、药品乃至化妆品等诸多领域，显现电位滴定计(上海雷磁仪器厂);紫外可见分光光出广阔的开发应用前景[21。·度计(SPecord50德国jena公司);高效毛细管电目前水解大豆蛋白常用化学降

4、解法和酶降解泳仪(CE一212，北京大学制造);冻干机(freezone法〔’1。化学降解法条件剧烈，蛋白质营养损失大，4.5美国LABCONCO公司)。较少采用。而酶降解法在温和条件下，可通过定1.2实验方法位水解产生特定的肤，且安全可靠，无副作用，因准确称取5。摊大豆分离蛋白，按照固液比加此大豆肤的定向酶解技术已成为国内外研究的热人水，溶解均匀，用稀碱或酸调节pH到选择条件，点。由于蛋白质易变性，对反应温度要求苛刻，酶加人适量的蛋白酶，用微波进行间歇式加热水解水解大多需6hr以上。因此我们采用微波加处理。反应过程保持温度和pH值恒定。反应结热〔4]，结合多酶复合水解方法，快速有效

5、的将大豆束后，沸水浴中加热巧min灭酶，冷却并于4伽厌)蛋白水解成小分子大豆肤和氨基酸。r/min的速度离心10min，取上清液进行酶解分析，剩余水解液在0.038bar真空度冻干机中冷冻1实验部分28h，研细置于干燥器中备用。分别将多肤分子量标准品和蛋白水解物冻干收稿日期:2(X巧·10一;修回日期:2阅7刃3伪甚金项目:陕西省教委专项工金资助项目(06JK166);院科研基金重点资助项目(伪xsYK107)联系人简介:陈均志(1949一)，男，教授，主要从事天然产物的改性与加工的研究。Email:liujing163@163，com第7期刘静等:多醛复合水解微波加热制备小分子大豆

6、肤753粉溶解，沸水浴中加热5而n，离心分离，取上清液尔数(nun心9);htot一每9原料蛋白质的肤键毫经0.45卿膜过滤，超声脱气后在(loommoFL摩尔数(InlnoFg)，对于某一特定的蛋白质来讲Tri犷HCI+0.1%SDS+0.1%PEO，pHS.5)缓冲htot是一个常数，大豆蛋白htot二7.snunol/g。溶液中运行，于毛细管电泳中进样分析。1.3测定方法2结果与讨论蛋白酶活力测定:紫外法[5];蛋白质含量测定:半微量凯氏定氮法一2.1中性蛋白酶水解最佳工艺条件的选择CB5009，5一85;按照1.2，1.3实验方法，在其它因素不变时，游离氨基氮测定:甲醛电位滴

7、定法te];改变某一因素，考察此因素对水解反应的影响。水解度的计算[6J:DH=丫htotxloo%实验结果见表1。式中:h一水解后每9蛋白被裂解的肤键毫摩表1不同因素对氮基氮的影响Tab.IE乐ectofthevariou.公比加功toAN序酶用量温度底物浓时间。PnA到tm『L)AN(m『L)AN(m了L)AN(m岁L)AN(m岁L)亏(砂别%)(℃)度(%)(而n)..，1曰勺内J153751733132014616.5且246J.且4nU41643