黄连素对肠黏膜上皮细胞分泌细胞因子的影响研究

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1、分类号:R392.11单位代码：10159密级：公开学号：201520056硕士学位论文(全日制硕士人员申请硕士学位)中文题目：黄连素对肠黏膜上皮细胞分泌细胞因子的影响研究英文题目：Theeffectofberberineonthesecretionofcytokinesinintestinalepithelialcells论文作者：刘小艺指导教师：吕昌龙教授学科专业：免疫学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文黄连素对肠黏膜上皮细胞分泌细胞因子的影响研究Theeffectofberberineonthesecretionofcyto

2、kinesinintestinalepithelialcells论文作者刘小艺指导教师吕昌龙教授申请学位医学硕士培养单位基础医学院一级学科基础医学二级学科免疫学研究方向黏膜免疫论文起止时间2015年11月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月I中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了

3、明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：年月日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日II中国医科大学硕士学位论文摘

4、要目的：本文利用葡聚糖硫酸钠（DSS）诱导的小鼠IBD模型，给予黄连素处理，分离小鼠肠黏膜上皮细胞检测其在调节Th2和Th17功能中可发挥重要作用的细胞因子IL-6、IL-18、IL-23、IL-25和IL-33，同时检测小鼠肠固有层淋巴细胞几种代表性的细胞因子IL-4、IL-10、IL-17A和IFN-γ，以了解黄连素诱导肠黏膜上皮细胞分泌的细胞因子对免疫细胞可能的调节作用，以进一步探究黄连素通过影响肠黏膜上皮细胞细胞因子分泌的种类和水平，间接调节肠道免疫细胞免疫功能，减轻肠道炎症的新机制。研究方法：1、模型建立及实验分组：利用C57BL/6

5、小鼠，建立DSS诱导的急性肠炎动物模型:五天内实验组（黄连素+DSS组）与对照组（DSS组）小鼠均自由饮用3%DSS（用PBS配置）溶液，空白对照组（PBS组）小鼠自由饮用PBS溶液。实验组小鼠每天早八点灌胃黄连素溶液，对照组与空白对照组灌胃等量的PBS溶液，三组小鼠于第六天处死。2、按照CooperHS的方法，每天定时测量小鼠体重，观察粪便性状、及大便隐血状况。3、组织学结果鉴定：急性肠炎模型诱导第六天，三组小鼠处死后各取近心端1/2处结肠组织0.5cm，浸泡于4%多聚甲醛溶液固定，经脱水、石蜡包埋、切片、HE染色后在光学显微镜下观察模型组织

6、形态结构以及炎症情况，并按照炎症分级标准评估病理组织学得分。4、肠黏膜上皮细胞的鉴定与细胞因子的检测：急性肠炎模型诱导第六天，处死小鼠，三组取肠管后均分离并提取肠黏膜上皮细胞（IEC）；用流式细胞仪鉴定IEC并细胞计数后；用Real-timePCR法、Westernblotting法检测肠黏膜上皮细胞细胞因子IL-6、IL-18、IL-23、IL-25、IL-33的表达水平。5、肠固有层淋巴细胞的鉴定与细胞因子的检测：急性肠炎模型诱导第六天，处死小鼠，三组取肠管后均分离并提取肠固有层淋巴细胞（LPL）；用流式细胞仪鉴定LPL并细胞计数后，在体外

7、刺激48h，用ELISA法检测其IL-4、IL-10、IL-17A、IFN-γ的表达水平。研究结果：Ⅲ中国医科大学硕士学位论文1、DSS诱导的小鼠急性肠炎模型建立成功。与PBS组小鼠相比，疾病模型小鼠均出现IBD症状，存在活动减少、体型消瘦、精神萎靡、排泄稀便、血便的现象，疾病活动指数上升，肠管明显缩短、狭窄变形、肠腔内存在稀便。但黄连素+DSS组小鼠较DSS组小鼠相比，疾病症状较轻，肠管病变情况较轻，结果说明经口投黄连素使小鼠急性肠炎症状减轻。2、HE染色结果显示，疾病模型小鼠与PBS组小鼠相比均存在杯状细胞消失、大量炎性细胞浸润的情况。DS

8、S组比黄连素+DSS组情况更加严重，杯状细胞大面积消失、隐窝大面积消失，炎性细胞浸润至黏膜肌层，黏膜增厚并伴有水肿（P<0.01）。结果说明经口投黄连