舌癌细胞外泌体的分离鉴定及MicroRNA的表达谱分析

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1、分类号：R782单位代码：10159密级：公开学号：201521183硕士学位论文（口腔医学硕士专业学位）中文题目：舌癌细胞外泌体的分离鉴定及MicroRNA的表达谱分析英文题目：MicroRNAprofileexperssedintonguecancercells-derivedexosomes论文作者：赵腾飞指导教师：黄绍辉教授学科专业：口腔医学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文舌癌细胞外泌体的分离鉴定及miRNA的表达谱分析MicroRNAprofileexperssedintonguecancercells-derivede

2、xosomes论文作者赵腾飞指导教师黄绍辉教授申请学位医学硕士培养单位口腔医学院一级学科口腔医学二级学科口腔医学研究方向口腔颌面外科论文起止时间2017年11月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月Ⅰ中国医科大学硕士学位论文摘要目的：分离并鉴定舌癌细胞上清液中的外泌体，利用生物信息学分析细胞上清液外泌体MicroRNA的测序结果。研究方法：试剂盒提取Tscca细胞上清液中的外泌体，透射电镜观察外泌体结构，通过纳米颗粒跟踪分析仪测定大小分布及浓度，流式细胞术检测其标记蛋白CD9和CD81。鉴定成功后，通过高通量

3、测序技术对细胞上清液外泌体MicroRNA的表达谱进行研究，挑取富集的MicroRNA，用预测软件行靶基因预测及其基因本体和京都基因与基因组百科全书信号通路富集分析。结果：从Tscca细胞上清液中分离出小于150nm的具有外泌体典型杯状结构，表达外泌体标记蛋白CD9和CD81，鉴定为外泌体。对细胞上清液外泌体测序结果筛选出的MicroRNA预测靶基因，共筛选出247条MicroiRNA序列，生物信息学结果显示共有72条基因本体和46条信号通路与该实验MicroRNA测序结果有关，显著富集的基因本体以调控过程为主，进一步通路分析后发现主要集中于细胞

4、的RNA转录、核糖体、嘌呤代谢、自噬、氧化磷酸化、EB病毒感染和代谢信号通路等过程，和肿瘤的发生发展密切相关。结论：本研究成功分离并鉴定了舌癌细胞上清液中的外泌体，外泌体中所包含的MicroRNA可能参与肿瘤的调控，这与外泌体的生物学功能相关。关键词：舌癌；外泌体；MicroRNA课题资助：沈阳市中青年科技创新人才支持计划项目（RC170078）沈阳市科技计划项目（F-16-102-4-00）III中国医科大学硕士学位论文AbstractObjective:Theaimofthisstudywastoisolatedexosomesrelease

5、dbytounguecancercellsupernatantandanalysisexosomalMicroRNAexpressionprofoile.Methods:ExosomeswereisolatedfromTsccacellssupernatantbykitsandinspectedbyscanningelectronmicroscopy,quantifiedviananoparticletrackinganalysis,verifiedbyflowcytometrylabeledCD9andCD81,inthesemeansdida

6、preliminaryanalysisofthemorphologicalandmolecularbiologyoftheexosomes.TheexpressionprofilesofTsccacellsderivedexosomesMicroRNAwerestudiedbyhighfluxsequencingtechnology,thepotentialtargetsoftheMicroRNAwerepredicted.GeneOntologyandKyotoEneyclopediaofGenesandGenomesanalysiswerep

7、erformedtodeterminetheexosomesMicroRNA.Results:Thetypicalcup-shapedstructureoftheexosomeswasisolatedfromtheTsccacellsupernatant,whichwaslessthan150nm,andthemarkerproteinCD9andCD81wereexpressedasexosomes.WeanalyzedmicroRNAexpressioninexosomesfromTsccacells,intotal,247MicroRNAs

8、,bioinformaticalanalysisrevealedthat72GeneOntologytermsand46signalin