HPLC法测定肾炎舒片中人参皂苷Re的含量.doc

《HPLC法测定肾炎舒片中人参皂苷Re的含量.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、HPLC法测定肾炎舒片中人参皂苷Re的含量【摘要】肾炎舒片由人参、茯苓等十味中药材组成的中药复方制剂，是卫生部批准生产的三类新药。具有益肾健脾、利水消肿之功效。本文以君药人参为其定量指标，采用高效液相色谱法，选用C18柱和乙腈-0.05%磷酸溶液（99:400）为流动相，检测波长为203nm，流速：0.8ml/min，理论塔板数按人参皂苷Re峰计算应不得低于2500。其标准曲线为Y=17766834.51＋232952.30xr=0.9999在2.0～16.0μg范围内成良好线性，平均回收率（n

2、=6）为97.34%，RSD1.5%。该方法灵敏度高，重现性好，结果准确、可靠。【关键词】肾炎舒片人参皂苷Re含量高效液相色谱法　　肾炎舒片由人参等十味中药材，经加工提取制成。用于治疗脾肾阳虚型肾炎引起的浮肿、腰痛、头晕、乏力等症。人参是方中的君药，具有大补元气、助精养神的作用，且又为细贵药材。因此，我们采用高效液相色谱法对人参中的人参皂苷Re进行含量测定，作为其制剂内在质量控制的指标，方法简便，灵敏度高，重现性好。1仪器与试药1.1仪器高效液相色谱仪LC-10AT（日本岛津）；检测器：紫外；数

3、据处理：SPD-10A；电子天平：METTLERAE240（瑞士）。1.2试药人参皂苷Re对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号：0754-9911，供含量测定用；乙腈为色谱纯。肾炎舒片、人参原料均由吉林鹿王制药有限公司提供。2色谱条件　　色谱柱：AichromBondAQC185μm4.6×250mmAI-04012822；柱温：40℃；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（99：400）；流速：0.8ml/min；纸速：1mm/min；检测波长：203nm[1]；灵敏度：AUFS0.04；理论

4、塔板数不得低于2500。3对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液3.1对照品溶液的制备精密称取人参皂苷Re对照品10mg，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Re0.4mg的溶液，即得。3.2供试品溶液的制备[2]4取装量差异项下的本品，除去包衣，研细，取粉末4g，精密称定，置索氏提取器中，加氯仿回流提取至提取液无色，弃去氯仿液，挥尽氯仿，加甲醇加热回流提取至提取液无色，收集甲醇液，蒸干。残渣用正丁醇饱和的水30ml使溶解，转移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次（20、20、20、15ml），合并正丁

5、醇液，用3倍量氨试液振摇洗涤3次，弃去氨试液，合并正丁醇液，蒸干，残渣用水2～5ml溶解，装入D101漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次（20、20、20、15ml），合并正丁醇液，用3倍量氨试大孔吸附树脂柱（湿法装柱，内径1.5cm，长17cm，用水洗至无醇味，备用）上。先用水100ml洗脱，弃去洗脱液，继用20%乙醇100ml洗脱，弃去洗脱液，再用70%乙醇100ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，用甲醇定量转移至5ml容量瓶中，即得。3.3人参阴性对照溶液的制备取除去人参，其他成分按处方比例加入，照

6、“肾炎舒片”制备方法制成阴性对照品，按“供试品溶液的制备”方法制成人参阴性对照溶液。4检测波长的确定　　参照《中国药典》2005年版一部人参【含量测定】项下，选用203nm为其检测波长。5系统适用性试验的考察　　依上述方法，由仪器给出的理论板数n=7318。该色谱条件下，样品可得到很好的分离，参照药典及实验，规定理论板数按人参皂苷Re峰计不低于2500。6流动相的选择　　参照《中国药典》2005年版一部人参【含量测定】项下的流动相的比例，以人参皂苷Re色谱峰的保留时间及分离度为判定指标，经反复试

7、验证实：乙腈-0.05%磷酸溶液（99:400）适合本法且分离效果较好，故定为本法的流动相。7提取方法的选择　　曾参照《中国药典》2005年版一部人参【含量测定】项下的提取方法处理样品，上机后杂质峰多；后经反复实验采用本方法，杂质峰较少，分离度较好，利于含量测定。且经薄层结果显示，提取较彻底，故提取方法如前述。8阴性对照溶液的测定　　为进一步考察实验设计及测定方法的可行性，吸取本液20μl注入液相色谱仪，按上述方法测定，结果表明人参阴性对照色谱图在人参皂苷Re相应的保留时间附近无干扰峰，证明本方

8、法可行。9稳定性试验　　分别精密吸人参皂苷Re对照品溶液，常温放置，每间隔一定时间以相同体积20μl（定量环）注入液相色谱仪中，依法测定，以人参皂苷Re峰面积为指标，测定其稳定性，结果见表1。表14人参皂苷Re稳定性试验结果表明：在48小时内，人参皂苷Re在常温条件下均基本稳定。10标准曲线制备　　精密吸取配制成不同浓度的人参皂苷Re（0.10、0.20、0.40、0.60、0.80mg/ml）的对照品溶液20μl（定量环），注入高效液相色谱仪中，测定。以各自的浓度（mg/ml）为横坐标、峰面积