MicroRNA-449a调控HaCaT细胞中Bcl-2的表达

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1、分类号：R739.5单位代码：10159密级：公开学号：201520470硕士学位论文（临床医学硕士专业学位）中文题目：MicroRNA-449a调控HaCaT细胞中Bcl-2的表达英文题目：MicroRNA-449aregulatestheexpressionofbcl-2inHaCaTcells论文作者：郑姝雯指导教师：何春涤教授学科专业：皮肤病与性病学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文MicroRNA-449a调控HaCaT细胞中Bcl-2的表达MicroRNA-449aregulatestheexpressionofbcl-2inHaC

2、aTcells论文作者郑姝雯指导教师何春涤教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科皮肤病与性病学研究方向皮肤病与性病学论文起止时间2016年10月—2017年12月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年5月中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律

3、结果由本人承担。论文作者签名：日期：2018年5月24日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年5月24日日期：2018年5月24日中国医科大学硕士学位论文摘要目前研究最多的微小RN

4、A(MicroRNA(miRNA)，它们是高度保守的非编码RNA分子，由19-25个核苷酸组成，在细胞凋亡、细胞周期阻滞及细胞分化中起着关键的作用。在本实验中主要研究MicroRNA-449a，它是细胞凋亡、细胞周期停滞、细胞分化强有力的诱导剂，所以进一步探讨miR-449a对细胞凋亡的调控作用，为将来对肿瘤的治疗及预后有指导意义。Bcl-2家族是调节凋亡的线粒体相关蛋白，由Tsujimoto等从淋巴瘤中克隆，而命名为B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcelllymphoma/leukemia-2,Bcl-2）。Bcl-2家族成员可分为两大类：①抗凋亡蛋白类型：主

5、要包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、A1、Mcl-1等，具有抗凋亡作用。②促进凋亡蛋白类：该类型成员具有促进凋亡的作用，主要包括：Bax、Bak1、Bok、Bid、Bad等。Bcl-2家族蛋白是必不可少的细胞凋亡调控因子，是位于染色体18q21.3上的BCL2基因编码的。BCL-2作为一类细胞凋亡相关基因，在调控细胞凋亡、降低缺血再灌注损伤、抗肿瘤方面具有重要作用，更是在癌症发生和发展中的关键因素。为进一步深入研究BCL-2的表达及调控机制，对更好的治疗肿瘤等疾病具有重要意义。目的：在本研究中我们探讨miR-449a对人永生化角质形成细胞（HaCaT

6、）中Bcl-2表达的调控，及诱导细胞凋亡的机制，以及进一步对肿瘤的治疗及预后有指导意义。材料和方法：首先进行HaCaT细胞培养，然后将miR-449a转染入HaCaT细胞中，分别对转染后24h、48h、72h的HaCaT细胞进行相对应的RNA提取及蛋白提取，将标本冻存在－80℃冰箱保存。再将提取的RNA及蛋白利用逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Westernblot）检测bcl-2的表达量。实验结果：转染过miR-449a的HaCaT细胞系中，经过RT-PCR及Westernblot检测方法，发现转染的miR-449a时间越长，BCL-2的表

7、达情况是明显下降的。结论：miR-449a是细胞凋亡有效的诱导剂，可以有效抑制抗凋亡基因BCL-2的表达，从而可能促进细胞凋亡。关键词：miR-449a；BCL-2；HaCaT细胞；细胞凋亡；肿瘤；调控I中国医科大学硕士学位论文AbstractCurrentlythemoststudiedmicroRNAs(miRNAs),whicharehighlyconservednon-codingRNAmoleculescomposedof19-25nucleotides,playakeyroleinapoptosis,cellcyclearrest,andcell

8、differentiation.Inthisexpe