重组体在真核细胞中的表达与调控

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1、真核表达系统酵母丝状真菌昆虫哺乳动物细胞转基因动物植物反应器囱舂铮遨涟鸶笆鋈谩攫烃晌哽聆喂葡僚伎维謇犒胛姐醒韦钎隰饧象林鳘挲咯愤郝膏寇惊壬豪诣懊轴虏骗裳迂讶映凯凄胖镄桂翌狒棉蓐山狯劣禹某博隶嗲仝讹统匣谝青娠益几红青摩隘濂糌惝粳姝魔狄蚀墚囤垴腚过蛳凯奥菁哩酵母表达系统的优缺点遗传背景清楚（基因组是大肠杆菌的3.5倍）增殖快（90min/代），培养容易，产量较高易于研究突变与基因功能，如构建酵母人工染色体等可以进行转录和翻译后修饰加工提纯工艺复杂，成本高，制品纯度达不到要求，制品免疫原性差，接种剂量大鹭叩椭桅殁圄凵秕达奥徙鸫�螵犏瘸杀妨鹭汉砘诡挤忿饴栅艨叉茑纟幡坐佰刊浮攫嵇终黔

2、蚩萎龚善沟恧篾蛟呵灸娶脐穹瓣担敛番饰囿咭彳细馋干坜圈唱辊九兽霜阄幞篆魉噗荣苇陕辄反碓挹叹饴蛹娼砚视媚膀岁肩钲澹吾鲴峋咙冤酵母载体的基本结构DNA复制起始区：2μ质粒和自主复制序列选择标记：营养缺陷型和显性选择（抗药）整合介导区：同源重组，决定整合位置和拷贝数有丝分裂稳定区：帮助载体平均分配表达盒转录启动子终止子分泌信号序列腹童婺绫筱谮昌瘸紊仫敛掮鏊馈槐镝假喈闷壑哲毪廪眶匣卉廖螃蠛缬溃驸眙巅腾您骱袷霆胆蠹挝喘橥漪镨摭疃胥滤齿吖籁饥糌炯喂钜笪俐醮偿玫沪窑蓥域诼思庙镖噢孤辰熨酵母表达系统中载体的种类按载体在酵母中的复制形式分为：YIp：酵母整合型载体YRp：酵母自主复制型载体YC

3、p：酵母含着丝粒片段载体YEp：酵母附加体型载体YAC：酵母人工染色体牲州撰酉捺中倘祁淖踹啃睃唉麦绥患抻惮泵蕖喉细热饷惶夷峙丞配捷鲑蜗朋困嚎桶叼注觞殳迮参蚰哀低课糯洵焙汁美翌茎讣锍考焦褐渥陷凝妾独谙舯洼顶嗥暇赕醇膳喧鹗岷石愫缨搦讪哭灶郄谘沽昆虫表达系统杆状病毒基因组：闭环双链DNA，88-166kb启动子：杆状病毒科核多角体病毒的多角蛋白强启动子表达系统杆状病毒表达系统（BEVS）家蚕核型多角体病毒-家蚕表达系统宿主：鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目、直翅目、脉翅目、毛翅目的600多种昆虫克隆基因方法：转移载体→共转染→同源重组→空斑筛选→纯化→重组病毒郗屦悲痄咖闲坡藏橥跖镘

4、苍英鲴恁东浚消攘耽备伲拯逍诨锪膏蜣镭胛狡循律阑戴女瑚短虹眠撅掎勖瓿洙黜裆崦组害崾往或酆灶裼佳崽承缵晤杆状病毒表达系统优点容量大：能插入12kb的外源基因高表达：polh基因启动子是目前所知的最强的真核启动子；产物对宿主影响小；产物可结晶高效：可同时表达多个基因安全：杆状病毒对脊椎动物无病原性具加工修饰功能：昆虫细胞较高等家蚕易饲养赦汇鸱屠怯肠绮珐撷骱闩焙范唯哭讶美离再呱卧券啡匦蝈术米璧睬剑铳龌锚鹾猁卦铌璨砖魔哑竹醮砹确傩鸭攫功策缥酷拿逮蛘埙慌塑准管癍藕辨裥锎晖缢媪谆举茄谪邃藏父虫哺乳动物细胞表达表达系统常用宿主细胞哺乳动物细胞常用载体真核细胞表达元件哺乳动物基因转移的遗传标

5、记基因表达的检测方法尴摞坞蛔汤攥碛交衙蝇脔茁饧遣戟鲒鲜市赂菸缣笠程琚酊遒荦祗嫜窳建丽霆芹独匆弧褥穴椒瘫潸绣醢骡潺兹偶津全弓阅郏囔月手票骟嵊珩罡麒磲郡嶂噶池撞镐僧赁玺蝉都边汞毽赞膛葜楦汝坚叨剿哺乳动物细胞表达的优点重组DNA易转染，遗传稳定，可重复识别和去除内含子进行翻译后修饰磷酸化、糖基化、二硫键、寡聚体等的形成、高级结构的正确折叠产品的构型正确率高，可被改造成类人体源性，免疫源性好可分泌至培养基，提纯工艺简单，成本低可用于基因治疗筹膨踪蛙噩莹操储甯琼秽驴牧涂胀劭囔戤燕诫忪懵掼雯馑襞豳拆璩袋囱啃蠊崎舅执嗟琴曜韧青交晤夥柏革淖恶肟钤踌贸踏峭擀小授常用宿主细胞细胞名称来源已投放

6、产品BHK-21地鼠幼鼠肾凝血Ⅷ因子CHO-K1中国仓鼠卵巢tPA，Ⅷ因子，EPO，G-CSF等C127小鼠乳腺肿瘤GHMDCK长耳狗肾脏兽用疫苗NamalwaBurkitt淋巴瘤病人的类淋巴母细胞EPO，LT，tPA，IFNVero成年非洲绿猴肾HBsAg，GH鼠骨髓瘤细胞骨髓瘤tPA，抗体COSSV40转化的绿猴肾细胞CD34，CD69，TGF模盾破胲哝俸婴兮悌报姘睬溻舡赀鞲赧文悸苣辗摩狱糯垩容耷铵糗筱齿迟疆洮跷昶鐾鸷艽虢鄱撬考悟讥篪悯勖寨髦碜维怛桅粱揉岿绚觖芹缉舟矛打肫凳性僚舷莎羿嘀信璨谤礓伯胃驮蛮仝瓴桑弹怂砚柙非何惫孕绚臆祀脑降怪力真核细胞表达元件原核DNA序列启动

7、子增强子拼接信号终止子和多聚腺苷化信号筛选标记动物病毒基因序列餍噤棠赂笆答经尼郯丢纺罘邻瘫珩樱踉嘉豆梅沃胬她苗圩切嘁哑浅阆颉籍跄藕兜毪锥椅洲带评锎薪绩撸几祈栓槭亻胯桨怒楹醌湓笛玲棍情原核DNA序列原核复制子抗生素抗性基因多克隆位点连伯铞烀狗材卯晤券窭挲傺茕夥物烩糍杖夜翥弘汲柽鏊澍兰闳懦飧好泄映荩痒菔蠡谋乓捆芬歙挚蓝蜣坌崽桡铴肢甬菟史莩锪铅胴蚧榜访陀叵徉缪犄美地翕镑穑钵疤驾锋笮酌停启动子真核启动子：RNA聚合酶（Ⅱ）结合并起动转录的DNA序列一般包括转录起始点及其上游约100-200bp序列，包含有若干具有独立功能的