slanDC在HIV感染靶细胞中作用的研究

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1、分类号：R512.91单位代码：10159密级：公开学号：201520179硕士学位论文中文题目：slanDC在HIV感染靶细胞中作用的研究英文题目：StudyontheroleofslanDCinHIVinfectedtargetcells论文作者：汪媛媛指导教师：耿文清教授学科专业：医学实验学完成时间：2018年3月中国医科大学硕士学位论文slanDC在HIV感染靶细胞中作用的研究StudyontheroleofslanDCinHIVinfectedtargetcells论文作者汪媛媛指导教师耿文清申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科基础医学二级学科医学实验学研究

2、方向slanDC在HIV感染中的作用论文起止时间2016年3月-2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年4月中国医科大学硕士学位论文摘要目的：病毒在细胞与细胞间的传播是人类免疫缺陷病毒（humanimmunodeficiencyvirus，HIV）在人体内播散的重要途径。树突状细胞（dendriticcell，DC）是人体内功能最强的抗原提呈细胞，在诱导T细胞增殖活化，启动初次免疫应答中发挥重要作用，但同样也会在HIV向靶细胞传播的过程中起到桥梁的作用。传统的DC主要分为髓系来源的DC（MyeloidDC，MDC）及类浆细胞样DC（Plasmac

3、ytoidDC，PDC）。但后来KnutSchäkel等又发现一群新的DC亚群，其细胞表面特异性表达6-磺基N-乙酰乳糖胺（6-sulfoLacNAc），因而被称为slanDC，可以用单克隆抗体M-DC8来识别。不同于传统DC，slanDC表达CD16，细胞学特征更类似单核细胞，具有髓系来源细胞的特征，并且在外周血中的数量比MDC和PDC多，约占外周血单个核细胞（Peripheralbloodmononuclearcell，PBMC）的0.6%-2%。体外研究结果显示，单核细胞诱导的树突细胞（monocyte-deriveddendriticcell，MDDC）在HIV的反式

4、传播中起到重要作用。提示slanDC在HIV向靶细胞的传播中可能发挥重要作用。HIV病毒在细胞间的传播有种主要机制。第一种，即顺式传播，HIV-1感染靶细胞，其RNA经反转录形成DNA整合到靶细胞DNA上，跟随宿主细胞复制产生子代病毒释放到细胞外临近另外一个靶细胞的地方，从而感染新的靶细胞。第二种反式传播，病毒在细胞中并不完成逆转录、整合、复制等，而是仅仅将细胞作为桥梁，通过一些表面分子捕获HIV病毒并保留在细胞表面，在靠近另一个靶细胞时形成病毒学突触，通过这种密切接触传播病毒。slanDC上表达DC-SIGN，这是一种在HIV向靶细胞传播中起重要作用的分子。而证据表明单核、

5、巨噬细胞、单核细胞诱导的树突细胞（monocytederiveddendriticcells，MDDC）均能通过siglec1向靶细胞传递HIV。本研究拟通过对HIV感染者的研究，明确HIV感染者以及HAART治疗有效者slanDC表面是否表达siglec1及水平；通过的slanDC染毒后与靶细胞共培养的体外实验，明确slanDC是否能在HIV的细胞间传播中起作用，探讨这种作用是否与siglec1相关，为揭示slanDC在HIV感染过程中细胞间的传播途径提供依据。研究方法：1、研究对象。14例HIV感染未治疗者，28例高效抗逆转录病毒治疗（highlyactiveantire

6、troviraltherapy，HAART）有效者，均来自中国医科大学附属第一医院红丝带门诊。健康对照组（NC）19例，为随机抽取的HIV抗体阴性、I中国医科大学硕士学位论文未暴露于HIV的健康人。2、CD4+T细胞绝对值的检测。将20μlBD公司CD4FITC/CD8PE/CD3PerCP试剂加入绝对计数管中，逆向加样法加入50μl混匀的抗凝全血，室温避光15min，加入1×免洗溶血素450μl，室温避光15min，应用FACSCalibur流式细胞仪进行检测，MultiSET软件分析结果，得到CD4+T淋巴细胞的绝对值。3、HIV-1病毒载量测定。以1200μl血浆采用标

7、准版模板制备法提取RNA，采用Roche公司TheCOBAS®AmpliPrep®/COBAS®TaqMan®HIV-1Test试剂盒在RocheCOBAS®AmpliPrep®上提取核酸后手工转移到COBAS®TaqMan®系统进行全自动PCR反应体系制备及病毒载量检测。4、HIV分离株扩增。取10ng病毒株感染5×106经PHA刺激后的健康人PBMC2.5h，加D10培养液调整浓度至1×106/ml，置于37℃，95%湿度，5%CO2培养箱。每2天收集培养上清并补充培养基，每周补充PHA刺激后健康人