IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌的临床特征及预后的关系

《IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌的临床特征及预后的关系》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

分类号：R737.31单位代码：10159密级：公开学号：201520289硕士学位论文中文题目：IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌的临床病理特征及预后的关系英文题目：TheassociationbetweenIL-22andIL-22R1withtheClinicalcharacterizesandPrognosisinOvarianSerousCystadenocarcinoma论文作者：崔静恩指导教师：佟晓光教授学科专业：妇产科学完成时间：2018年3月 中国医科大学硕士学位论文IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌的临床特征及预后的关系TheassociationbetweenIL-22andIL-22R1withtheClinicalcharacterizesandPrognosisinOvarianSerousCystadenocarcinoma论文作者崔静恩指导教师佟晓光教授申请学位医学硕士培养单位第一临床学院一级学科临床医学二级学科妇产科学研究方向妇科肿瘤的临床及基础研究论文起止时间2017年3月—2018年3月论文完成时间2018年3月中国医科大学（辽宁）2018年3月I 中国医科大学硕士学位论文摘要目的：截至目前，IL-22及IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌中作用的相关研究暂未报道。本实验采用免疫组织化学方法检测蛋白质分子生物标记物IL-22及其受体IL-22R1在正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺瘤组织以及卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达情况，并应用统计学方法分析IL-22及其受体IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌患者的临床病理因素及预后的关系。研究方法：本研究收集了2007年1月—2011年12月在中国医科大学附属第一医院妇科接受手术治疗的123例患者的临床资料，所有病例临床病理资料完整，均经病理证实，且术前没有经过新辅助化疗及放疗等治疗。采用了免疫组织化学的实验方法检测IL-22及其受体IL-22R1在93例卵巢浆液性囊腺癌组织、23例卵巢浆液性囊腺瘤组织、7例卵巢组织中的表达情况。应用卡方检验、spearman相关性检验、Kaplan–Meier和log-rank检验法分析IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌临床病理因素及预后的关系。免疫组化染色结果的判定采用双半定量评分法。阳性细胞百分比评分：0（无染色）、1（1-25%细胞染色）、2（26-50%细胞染色）、3（51-75%细胞染色），4（超过75%的细胞染色）。染色强度为：0（无），1（弱），2（中度），3（强）。最终评分是由染色阳性细胞率评分结果与染色强度评分结果相乘得到的。两位有经验的病理专家对所有组织切片进行评分，同时按照新的卵巢癌病理分级标准对所有组织切片重新进行分级，有争议的部分由第三位病理专家评判。应用SPSSPASWStatistics18节（IBM，芝加哥，IL），GraphPadPrism5（拉霍亚、CA、美国）软件进行统计学分析，P<0.05被认为有统计学意义。结果：（1）IL-22在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达显著高于正常卵巢组织（P＜0.01）和卵巢浆液性囊腺瘤组织(P＜0.01），IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达显著高于正常卵巢组织（P＜0.01）和卵巢浆液性囊腺瘤组织(P＜0.01），卵巢浆液性囊腺癌中IL-22与IL-22R1的表达呈正相关（P＜0.01）；（2）IL-22和IL-22R1的表达与卵巢癌FIGO分期和（P＜0.01）血清CA125水平（P＜0.05）呈正相关，IL-22和IL-22R1的表达与年龄（P＞0.05）和病理分级（P＞0.05）均无明显相关；（3）IL-22和IL-22R1阳性表达组患者与阴性表达组患者的术后生存时间及无瘤生存期无明显差异（P＞0.05）。结论：IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达明显高于卵巢浆液性III 中国医科大学硕士学位论文囊腺瘤组织和正常卵巢组织，并且卵巢浆液性囊腺癌中IL-22和IL-22R1的表达正相关，此外IL-22和IL-22R1与卵巢癌的手术病理分期及血清CA125水平呈正相关，说明IL-22通过与IL-22R1的结合发挥作用，参与卵巢浆液性囊腺癌的发生发展和转移侵袭过程，可作为用来诊断和监测卵巢浆液性囊腺癌复发的有价值的标记物。关键词：IL-22；IL-22R1；卵巢浆液性囊腺癌；免疫组化IV 中国医科大学硕士学位论文AbstractObjectives:Sofar,thestudyoftheroleofIL-22andIL-22R1inovarianserouscysticadenocarcinomahasnotbeenreported.Inthisstudy,immunohistochemicalassaywasusedtodetecttheexpressionofproteinmolecularbiomarkersIL-22andtheirreceptorIL-22R1innormalovariantissues,ovarianserouscysticadenomatissuesandovarianserouscysticadenocarcinomatissues,therelationshipbetweenIL-22anditsreceptorIL-22R1andclinicopathologicalfactorsandprognosisinpatientswithovarianserouscysticadenocarcinomawasanalyzedbystatisticalmethod.Methods:Thisstudycollectedtheclinicaldataof123patientswhounderwentgynecologicalsurgeryinthefirstaffiliatedHospitalofChinaMedicalUniversityinJanuary2007-December2011,andallthecaseswerecompletewithpathologicaldata,allofwhichwereconfirmedbypathology,andwerenottreatedbyneoadjuvantchemotherapyandradiotherapybeforeoperation.ImmunohistochemicalassaywasusedtodetecttheexpressionofIL-22anditsreceptorIL-22R1in93casesofovarianserouscysticadenocarcinoma,23casesofovarianserouscysticadenomaand7casesofovariantissue.TherelationshipbetweenIL-22andIL-22R1andclinicopathologicalfactorsandprognosisofovarianserouscysticadenocarcinomawasanalyzedbyusingcard-squaretest,Spearmancorrelationtest,Kaplan–meierandLog-ranktest.Thescoreofimmunohistochemicalstainingusedthedoublesemiquantitativescoringmethod.Positivecellpercentagescoringcriteria：zeropoints(0-5％)；onepoint(6％-25％)；twopoint(26％-50％)；threepoint(>50％)；Stainingintensityscoringcriteria：zeropoint(nostain)；onepoint(weakstain)；towpoint(moderatestain)；threepoint(strongstain).Stainingintensityscoremultipliedbythepositivecellpercentagescoreasthefinalscore.Thecontroversialpartwasjudgedbyathirdpathologist,withtwoexperiencedpathologistsgradingalltissueslicesandgradingalltissuesectionsaccordingtothenewpathologicalgradingofovariancancer.StatisticalanalyseswereperformedwithSPSSPASWStatisticsv.18.0(IBM,Chicago,IL).andGraphPadPrism5statisticssoftware（LaJolla,CA,USA）.P<0.05wasconsideredsignificance.Results:(1)TheexpressionofIL-22inovarianserouscysticadenocarcinomawasV 中国医科大学硕士学位论文significantlyhigherthanthatofnormalovariantissue(p<0.01)andovarianserouscysticadenoma(p<0.01),theexpressionofIL-22R1inovarianserouscysticadenocarcinomawassignificantlyhigherthanthatofnormalovariantissue(p<0.01)andovarianserouscysticadenoma(p<0.01),theexpressionofIL-22and-IL-22R1inovarianserouscysticadenocarcinomawaspositivelycorrelated(p<0.01);(2)IL-22andIL-22R1werepositivelycorrelatedwithovariancancerFIGOstage(P<0.01)andserumCA125level(p<0.05),andtheexpressionofIL-22andIL-22R1wasnotsignificantlycorrelatedwithage(P>0.05)andpathologicalgrading(P>0.05);(3)Therewasnosignificantdifference(P>0.05)betweentheOver-allsurvivaltimeandtheDisease-freesurvivaltimeinpatientswithIL-22andIL-22R1positiveexpressionGroupandIL-22andIL-22R1negativeexpressiongroup.Conclusions:TheexpressionofIL-22andIL-22R1inovarianserouscysticadenocarcinomawassignificantlyhigherthanthatofovarianserouscysticadenomaandnormalovariantissue,andtheexpressionofIL-22andIL-22R1inovarianserouscysticadenocarcinomawaspositivelycorrelated,inadditionIL-22andIL-22R1arepositivelycorrelatedwiththeoperativepathologicalstagingandserumCA125levelofovariancarcinoma,ItisindicatedthatIL-22canbeusedasavaluablemarkerfordiagnosingandmonitoringtherecurrenceofovarianserouscysticadenocarcinomabycombiningwithIL-22R1andparticipatinginthedevelopmentofovarianserouscysticcarcinoma.Keywords:IL-22;IL-22R1;ovarianserouscystadenocarcinomas;ImmunohistochemistryVI 中国医科大学硕士学位论文英文缩略语英文缩写英文全称中文全称IL-22Interleukin-22白细胞介素-22IL-22R1Interleukin-22Recptor1白细胞介素-22受体1FIGOInternationalFederationof国际妇产科联合会GynecologyandObstetricsS-PStreptavidin/Peroxidase过氧化物酶标记的链霉卵白素PBSPhosphatebuffersaline磷酸缓冲盐溶液DAB3,3'-Diaminobenzidine3,3'-.二氨基联苯胺VII 中国医科大学硕士学位论文目录摘要...................................................................................................................................IIIAbstract...............................................................................................................................V英文缩略语......................................................................................................................VIIIL-22和IL-22R1的表达与卵巢浆液性囊腺癌临床病理因素及预后的关系1前言...............................................................................................................................12材料和方法...................................................................................................................32.1主要试剂和仪器...................................................................................................32.1.1主要试剂.....................................................................................................32.1.2主要仪器.....................................................................................................32.2组织来源...............................................................................................................42.3实验方法...............................................................................................................52.3.1组织蜡块的制作.........................................................................................52.3.2过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组化法(S.P法)................................52.3.3电化学发光法（CA125测定）.................................................................52.4结果判定标准.......................................................................................................72.5统计学处理...........................................................................................................73结果...............................................................................................................................83.1IL-22与IL-22R1在不同卵巢组织中的表达情况及IL-22和IL-22R1表达间的相关性分析..............................................................................................................83.2卵巢浆液性囊腺癌中IL-22和IL-22R1的表达与临床病理特征的相关性分析....................................................................................................................................10VIII 中国医科大学硕士学位论文3.3IL-22与IL-22R1的表达情况与卵巢浆液性囊腺癌患者预后的关系............114讨论.............................................................................................................................135结论.............................................................................................................................16本研究创新性自我评价...................................................................................................17参考文献...........................................................................................................................18综述...................................................................................................................................21攻读学位期间科研成果...................................................................................................30致谢...................................................................................................................................31个人简介...........................................................................................................................32IX 中国医科大学硕士学位论文IL-22和IL-22R1的表达与卵巢浆液性囊腺癌临床病理因素及预后的关系1前言现代女性最常见的三大恶性生殖系统肿瘤之一——卵巢恶性肿瘤，其死亡率位于女性生殖系统恶性肿瘤之首[1]。大量研究表明，早期发现、诊断和治疗是减少卵巢恶性肿瘤相关死亡的最有效方法。但由于缺乏特异的症状，早期卵巢癌的诊断率非常的低，患者往往在晚期才能得到诊断，导致了卵巢恶性肿瘤治疗效果差、预后差、病死率高。卵巢浆液性囊腺癌在卵巢上皮性恶性肿瘤中占56%，是卵巢上皮性恶性肿瘤最常见的病理类型，预后差[2]。因此，为了及早诊断和及时有效地治疗卵巢浆液性囊腺癌，找到与其发生发展相关的生物标记物具有重要的意义。白细胞介素-22（IL-22）是IL-10细胞因子家族成员之一，最先于2000年由Dumoutieri等用IL-9刺激T淋巴瘤细胞系所发现[3]。人的IL-22表达主要是由包括CD4+T辅助细胞17(Th17)，Th22细胞，CD8+细胞毒性T细胞,自然杀伤（NK）细胞，γδT细胞和淋巴组织诱导r（LTi）-样细胞在内的几种T淋巴细胞亚群产生，但在巨噬细胞，成熟或不成熟DC，及非免疫细胞中都没发现IL-22的表达[4,5]。人白细胞介素-22(hIL-22)的基因是一个单的拷贝基因，定位于12号染色体的长臂上，它的DNA片段长约6Kb，其与IL-10之间的氨基酸序列有22%的同源性。IL-22蛋白由179个氨基酸构成，与人IL-21蛋白存在78%的同源性，并且与人IL-10R蛋白存在25%的同源性[6]。IL-22的信号是通过由两种亚基——特定受体IL-22R1和共享亚基IL-10R2组成的异二聚体跨膜受体传导的[7]，这两种亚基都归属于2型细胞因子受体家族[8,9]。IL-10R2普遍表达于各种细胞，IL-22R1选择性表达于上皮细胞如肝细胞、肺细胞、胰腺细胞、角质形成细胞、结肠上皮细胞和肾脏细胞等，但在免疫细胞中不表达[10]。因此，IL-22结合的特异性由IL-22R1决定。此外，IL-22作为一种由免疫细胞产生的细胞因子，能够调节其他组织细胞的功能，却并不作用于免疫细胞[11,12]。研究证实，IL-22与IL-22R1的胞外高亲和力的结构域结合，引起空间构象改变，然后IL-10R2再顺序性识别并结合到IL-22/IL-22R1，IL-22与受体结合后主要活化JAK1 中国医科大学硕士学位论文蛋白酪氨酸激酶/信号传导子和转录激活子（JanusKinasesignaltransducerandactivatoroftranscription，JAK/STAT）信号通路。研究发现，IL-22通过与H4IIE小鼠模型肝肿瘤细胞株表面受体结合的方式，能快速地激活JAK和酪氨酸激酶2，进而导致STAT、STAT3和STAT5磷酸化。IL-22也可激活3个主要的丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivatedproteinkinase，MAPK）信号通路[13]，包括MEK、ERK、RSK通路、JNK/SAPK通路和P38激酶通路[14]。我们已经知道，炎性细胞因子与肿瘤的发生发展与之间有着密切的关系，肿瘤微环境中的炎性细胞因子在肿瘤的发生发展中具有值得关注的重要的临床意义。已经有很多研究证实IL-22-IL-22R1信号通路在恶性肿瘤细胞的增殖、分化等生物学行为中起到作用[15]。如：肝癌，乳腺癌，结肠癌等。有学者认为IL-22本身不能启动肿瘤发生，因为他们对IL-22转基因小鼠的肝脏组织研究发现，虽然IL-22可持续高表达，但自发性肿瘤的发生率并未增加，相反IL-22可能更多地对已发生的肿瘤起到促进其进展的作用。Kim等[16]研究发现，在人乳腺癌组织中，IL-22的表达水平与MAP3K8和Pin1表达水平是正相关的，而敲除MAP3K8和Pin1可使乳腺癌细胞致瘤性降低，这个结果表明，对于乳腺癌发生发展来说，MAP3K8和Pin1可能是重要的分子靶点。Jiang等[17]在研究中发现，IL-22及其受体IL-22R1在人的结肠癌和溃疡性结肠炎组织中呈现一个高表达的状态，而且其表达与肿瘤体积呈正相关。此外，在结肠癌组织中检测到了IL-22激活STAT3磷酸化，表明IL-22可能通过STAT3的活化抑制癌细胞凋亡，从而起到促进肿瘤的生长和转移的作用。虽然目前TheHumanProteinAtla（s在线数据库）中的数据目前已经表明IL-22和IL-22R1在正常卵巢组织中不表达，但是IL-22及IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌组织中是否表达，它们的表达情况与卵巢浆液性囊腺癌患者的临床病理学特征及预后的相关性如何，仍未报道，有待进一步研究发现。2 中国医科大学硕士学位论文2材料和方法2.1主要试剂和仪器2.1.1主要试剂IL-22兔抗人多克隆抗体（Ab18499）（Abcam中国有限公司）IL-22R1兔抗人多克隆抗体（Ab5984）（Abcam中国有限公司）浓缩型DAB试剂盒、生物素一链霉卵白素免疫组化检测试剂盒（中杉-金桥生物技术有限公司）ElecsyCA-125II试剂盒无菌去离子水、二甲苯、苏木素、福尔马林、95％乙醇、75％乙醇、碳酸锂、过氧化氢、碳酸氢二钠、碳酸二氢钠、氢氧化钠、氯化钠注射液、氯化钾、树胶、盐酸等（辽宁新兴试剂有限公司）90％酒精配置：取95％酒精360ml，加蒸馏水稀释至380ml。80％酒精配置：取95％酒精320ml，加蒸馏水稀释至380ml。70％酒精配置：取75％酒精280ml，加蒸馏水稀释至300ml。配置3％过氧化氢溶液：分别将20毫升的30％过氧化氢溶液和180毫升的蒸馏水倒入量筒，混合均匀。柠檬酸钠缓冲液配置：分别将9毫升A液、4毫升B液、487毫升蒸馏水混合均匀。PBS缓冲液(磷酸缓冲盐溶液，PH：7.4)配置：分别取磷酸氢二钾(K2HP04)：0.279，氯化钾(KCL)：0.29，氯化钠(NaCL)：89放入量筒，倒入800毫升去离子水搅拌均匀。调节pH至7.4，定容至1L。2.1.2主要仪器冰箱（美的集团公司）显微镜及成像系统（Olympus公司）LEICA.RM2025组织切片机、ZT-12H生物组织自动脱水机（Leitz公司）E6000模块化组合分析系统（ROCHE公司）离心机、量筒、量杯、染色缸、染色架、烘箱、高压锅、KD.BM生物组织包3 中国医科大学硕士学位论文埋机、免疫组化笔、真空采血管、微量移液枪及枪头等。2.2组织来源如表1所示，收集2007年1月到2011年12月于中国医科大学附属第一医院妇科行卵巢切除术的7例正常卵巢组织、23例卵巢浆液性囊腺瘤组织和93例卵巢浆液性囊腺癌组织。纳入标准：有明确的病理诊断；排除标准：1、过去2周出现咳嗽、恶心、呕吐和腹泻等急性疾病的症状；2、伴有其他全身性肿瘤；3、伴有免疫系统或炎症性疾病；4、术前接受过免疫治疗或者化疗、放疗。中国医科大学伦理委员会已经批准了该项研究。所有患者均签署知情同意书。表1卵巢浆液性囊腺癌患者临床病理特征临床病理因素人数年龄（岁）93年龄范围（18-76）中位年龄（55）FIGO分期（2009）Ⅰ15Ⅱ15Ⅲ60Ⅳ3病理分级低级别25高级别68CA12593最小值-最大值（20U/ml-5000U/ml）中位数（600U/ml）癌症特异性死亡是32否26失访35复发是40否19失访354 中国医科大学硕士学位论文FIGO,国际妇产科联合会2.3实验方法2.3.1组织蜡块的制作取材：切取适宜体积的组织材料。固定：将切下的组织材料浸入固定液中（50％酒精90ml、冰醋酸5ml、福尔马林5ml），组织固定后充分水洗。脱水：将组织材料按次序放入70％酒精、85％酒精、95％酒精、100％酒精、100％酒精的梯度酒精溶液中。每步2小时。透明：将组织材料安顺序分别放入二甲苯与酒精等体积混合液、纯二甲苯、纯二甲苯溶液中。每步1小时。浸蜡与包埋：低温浸蜡（36℃），在泡有组织材料的二甲苯烧杯中逐步加入碎蜡至饱和，过夜12小时；高温浸蜡（50℃），将上步骤的二甲苯与石蜡混合液倒出（不倒出材料），将烧杯中加入纯石蜡，共12小时，过程中更换石蜡3次。组织蜡块制作完成。2.3.2过氧化物酶标记的链霉卵白素免疫组化法(S-P法)切片：对每一例蜡块进行连续性切片，厚度为4微米。烤片：将组织切片置于65℃恒温箱烘烤，以防脱片，烘烤时间4小时。脱蜡：将组织切片依次放入二甲苯溶液1、二甲苯溶液2、二甲苯溶液3中，每步15分钟，取出甩干；然后按顺序分别放入100％酒精1、100％酒精2中，每步10分钟，取出甩干；最后按顺序分别放入90％、80％、70％的梯度浓度酒精，每步5分钟，脱蜡完毕。PBS缓冲液冲洗3次，每次3分钟。消除组织内源性过氧化物酶：3％过氧化氢溶液孵育组织切片10分钟（室温下）。再用PBS缓冲液冲洗3次，每次各3分钟。抗原修复（柠檬酸钠）：将切片置入放有柠檬酸钠缓冲液500毫升的试剂缸。加热高压锅至水沸腾，将试剂缸放入高压锅，盖锅盖，加加压阀，达最大压强后计时2分30秒。取高压锅于自来水下冲洗直至可以打开锅盖，将试剂缸浸入冷水10分钟至室温，所有组织切片用蒸馏水快速冲洗2次，后用PBS缓冲液冲洗3次，每次3分钟。血清封闭：用免疫组化笔圈记组织，将切片置于湿盒，滴加A液即山羊血清，5 中国医科大学硕士学位论文湿盒中封闭20分钟。一抗孵育4℃过夜：甩干组织切片上的山羊血清，滴加稀释好的一抗。a:用PBS缓冲液以1：1500的比例稀释IL-22抗体，用移液枪吹打均匀，取一滴均匀滴于组织切片，将湿盒盖子盖好，放于4℃冰箱过夜;b:用PBS缓冲液按照1：700的比例稀释IL-22R1抗体，用移液枪吹打均匀，取一滴均匀滴于组织切片，将湿盒盖子盖好，放于4℃冰箱过夜。复温：次日8：00拿出湿盒，避光复温20分钟（室温下）。加二抗：用PBS缓冲液冲洗组织切片3次，每次3分钟，甩干后置于湿盒中，滴加二抗，孵育15分钟。滴加辣根过氧化酶：用PBS缓冲液冲洗组织切片3次，每次3分钟，然后放入湿盒中，滴加辣根过氧化酶，孵育15分钟。DAB显色：用PBS缓冲液冲洗切片4次，每次5分钟，甩干然后放置于湿盒，快速往每张切片上滴加DAB液（新鲜配置），显色，显微镜下观察5分钟。显色完毕后用自来水将切片上的DAB液轻轻冲掉。苏木素复染：用自来水、蒸馏水分别将组织切片快速清洗1次，后放入苏木素中染色（5分钟），自来水冲洗切片至水色清亮，放入盐酸酒精1分钟，后用自来水冲洗1次，放入碳酸锂中2分钟，后用自来水冲洗2分钟。组织脱水：将切片按顺序经70％、80％、90％梯度酒精逐一浸泡脱水干燥，每步各3分钟，取出后甩干。将切片按顺序浸泡于100％酒精I、II中，每步5分钟，取出后甩干。将切片按顺序浸泡于二甲苯溶液I、II，每步各10分钟。脱水、透明结束。封片：适量中性树胶滴加于组织中央，盖上盖玻片，轻按压挤出气泡，通风晾干。镜下观察留图及评分：由两名资深病理科医师以双盲法进行评分，有争议的部分由第三位资深病理科医师评分。2.3.3电化学反应法（CA125测定）标本采集：于早晨6：00时采集患者空腹血浆3毫升，标本用13mm直径的含有分离胶的黄盖负压真空采血管收集。检测步骤：将血浆离心后，取10微升血清标本，根据我院检验科的SOP文件，严格按照操作规程说明书，采用罗氏诊断公司电化学发光仪及配套试剂测定。6 中国医科大学硕士学位论文参考范围：0~35U/ml。2.4结果判定标准IL-22和IL-22R1均定位于肿瘤细胞的和胞膜。根据阳性细胞百分比和染色强度，所有组织切片采用半定量法评分。染色的百分比评分标准为0（无染色）、1（1-25%细胞染色）、2（26-50%细胞染色）、3（51-75%细胞染色），和4（超过75%的细胞染色）。染色强度为0（无），1（弱），2（中度），3（强）。最终的评分结果为强度评分乘以百分比评分。所有组织切片由两位有经验的病理专家进行评分，有争议的部分由第三位病理专家评分。应用SPSSPASWStatisticsv.18.0（IBM,Chicago,IL），计算出免疫反应评分的中位数（IL-22：6；IL-22R1:8），表达强度分为阴性（IL-22:0-4；IL-22R1:0-6）和阳性(IL-22:6-12,IL-22R1:8-12)。2.5统计学处理应用SPSSPASWStatisticsv.18.0（IBM,Chicago,IL），GraphPadPrism5（LaJolla,CA,USA）软件进行统计学分析。计数资料的相关性应用卡方检验分析，计量资料的相关性应用spearman相关性检验分析，生存曲线应用Kaplan–Meier和log-rank检验法绘制。P<0.05被认为有统计学意义。7 中国医科大学硕士学位论文3结果3.1IL-22与IL-22R1在不同卵巢组织中的表达情况及IL-22和IL-22R1表达间的相关性分析IL-22蛋白定位于癌细胞的胞浆和胞膜（图1，C），如表2所示，正常卵巢组织中无IL-22表达，分别有5例（21.7%）卵巢浆液性囊腺瘤组织和50例（53.8%）浆液性囊腺癌组织的IL-22呈阳性表达，正常卵巢组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中IL-22的表达有明显差异（P=0.000），卵巢浆液性囊腺瘤组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中IL-22的表达有明显差异（P=0.009）。IL-22R1蛋白定位于癌细胞的胞浆和胞膜（图1，G），如表2所示，正常卵巢组织中无IL-22表达，分别由5例（21.7%）卵巢浆液性囊腺瘤组织和54例（58.1%）浆液性囊腺癌组织的IL-22R1呈阳性表达，正常卵巢组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中IL-22R1的表达有明显差异（P=0.000），卵巢浆液性囊腺瘤组织与卵巢浆液性囊腺癌组织中IL-22R1的表达有明显差异（P=0.002）。如表4及图2所示，卵巢浆液性囊腺癌中IL-22的表达和IL-22R1的表达显著相关（r=0.781，P＜0.01）。表2IL-22和IL-22R1在3种不同卵巢组织中表达情况比较例数（%）例数（%）IL-22表达水平IL-22R1表达水平－＋－＋正常卵巢组织7（100）0（0）7（100）0（0）卵巢浆液性囊腺瘤18（78.3）5（21.7）18（78.3）5（21.7）卵巢浆液性囊腺癌43（46.2）50（53.8）a,b39（41.9）54（58.1）a,ca:IL-22和IL-22R1在正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺癌组织中表达情况的比较，P=0.000；b:IL-22在卵巢浆液性囊腺瘤组织和卵巢浆液性囊腺癌组织中表达情况的比较，P=0.009;c:IL-22R1在卵巢浆液性囊腺瘤组织和卵巢浆液性囊腺癌组织中表达情况的比较，P=0.002;8 中国医科大学硕士学位论文图1A-C:IL-22分别在正常卵巢组织，卵巢浆液性囊腺瘤，卵巢浆液性囊腺癌中的表达情况(400×)；E-G:TIL-22R1分别在正常卵巢组织，卵巢浆液性囊腺瘤，卵巢浆液性囊腺癌中的表达情况(400×)。表3卵巢浆液性囊腺癌中IL-22与IL-22R1表达水平间的斯皮尔曼相关分析斯皮尔曼相关分析IL-22IL-22R1IL-22－0.789**IL-22R10.789**－**在0.01级别（双尾），相关性显著图2卵巢浆液性囊腺癌中IL-22与IL-22R1表达相关情况的散点图9 中国医科大学硕士学位论文3.2卵巢浆液性囊腺癌中IL-22和IL-22R1的表达与临床病理特征的相关性分析如图1和表4所示，分析卵巢浆液性囊腺癌中IL-22表达与患者临床病理参数的关系发现，IL-22的表达与手术病理分期（FIGO，2009）（P=0.001）之间有显著关系，与病理分级间无显著相关（p＝0.492），分析卵巢浆液性囊腺癌中IL-22R1的表达与患者临床病理参数的关系发现，IL-22R1的表达与手术病理分期（FIGO，2009）（P=0.001）之间有显著关系，与病理分级间无显著相关（p＝0.636）。如表5和图3所示，IL-22的表达和血清CA125水平明显正相关（r=0.232，p＜0.05），IL-22的表达与卵巢浆液性囊腺癌患者的年龄无明显相关（r=0.059，P＞0.05）;IL-22R1的表达与血清CA125明显正相关（r=0.217，P＜0.05）。IL-22R1的表达与患者的年龄无明显相关（r=0.116，P＞0.05）。表4IL-22和IL-22R1表达水平与卵巢浆液性囊腺癌临床病理因素的关系例数（%）例数（%）IL-22表达水平IL-22R1表达水平－＋P值－＋P值FIGO疾病分期.001.001Ⅰ12(80.0)3(20.0)11(73.3)4(26.7)Ⅱ10(66.7)5(33.3)10(66.7)5(33.3)Ⅲ-Ⅳ21(33.3)42(66.7)18(28.6)45(71.4)病理分级.492.636低级别10(40.0)15(60.0)9(36.0)16(64.0)高级别33(48.5)35(51.5)30(44.1)38(55.9)表5卵巢浆液性囊腺癌中IL-22，IL-22R1和血清CA-125水平及年龄间的斯皮尔曼相关分析斯皮尔曼相关分析CA-125年龄IL-220.232*0.059IL-22R10.217*0.116*在0.05级别（双尾），相关性显著10 中国医科大学硕士学位论文图3A：IL-22表达与CA125水平相关情况的散点图；B：IL-22表达与年龄相关情况的散点图；C：IL-22R1表达与CA125水平相关情况的散点图；D：IL-22R1表达与年龄相关情况的散点图。3.3IL-22与IL-22R1的表达情况与卵巢浆液性囊腺癌患者预后的关系93例卵巢浆液性囊腺癌患者有34例失访，失访率为36.6％。93例卵巢浆液性囊腺癌患者中最短生存时间为2个月，最长为121个月，全组的中位生存时间为72（±34）个月，如图4A所示，在卵巢浆液性囊腺癌患者中，IL-22阳性表达患者与阴性表达患者的术后5年生存率之间无明显差异（P=0.1166，log-rank检验），如图2B所示，IL-22R1阳性表达患者与阴性表达患者的术后5年生存率之间无明显差异（P=0.5688，log-rank检验）。93例卵巢浆液性囊腺癌患者中最短无瘤生存时间为1个月，最长为121个月，全组的中位无瘤生存时间为60（±40）个月，如图4C所示，在卵巢浆液性囊腺癌患者中，IL-22阳性表达患者与阴性表达患者的无瘤生存时间之间无明显差异（P=0.3380，log-rank检验），如图4D所示，IL-22R1阳性表达患者与阴性表达患者的11 中国医科大学硕士学位论文无瘤生存时间之间无明显差异（P=0.8243，log-rank检验）。图4A：IL-22的表达情况与患者术后生存时间关系的生存曲线；B：IL-22R1的表达情况与患者术后生存时间关系的生存曲线；C：IL-22的表达情况与患者无瘤生存时间关系的生存曲线；D：IL-22R1的表达情况与患者无瘤生存时间关系的生存曲线。12 中国医科大学硕士学位论文4讨论由于炎症因子在许多方面都与肿瘤微环境有关，如流行病学、组织病理学和炎症等，许多研究者开始关注炎症因子在恶性肿瘤发生发展中的作用。2003年Denk等[18]用外源IL-22刺激大鼠肝癌细胞株H4IIE发现，STAT1，3，5在受到IL-22刺激5分钟后开始磷酸化，磷酸化过程可持续1小时，这是关于IL-22与恶性肿瘤的关系的首个研究。直到今天，IL-22与各系统恶性肿瘤关系逐渐被发现，如口腔鳞状细胞癌、肝细胞癌、胰腺癌、肺癌、胶质母细胞癌、膀胱癌和结肠癌[19]等恶性肿瘤。然而，关于IL-22及其受体IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌中作用尚不明确。为此，本实验应用免疫组织化学的方法研究IL-22和IL-22R1在3种不同卵巢组织——正常卵巢组织、卵巢浆液性囊腺瘤组织和卵巢浆液性囊腺癌组织中的表达情况，进一步分析了它们的表达情况与卵巢浆液性囊腺癌临床相关病理特征之间的关系，以及对患者预后的影响。首先，本研究应用了免疫组织化学的试验方法，观察IL-22和其特异性受体IL-22R1在不同卵巢组织中的表达情况，发现IL-22与IL-22R1在正常卵巢组织中的无表达，这与数据库TheHumanProteinAtlas中的相关研究结果是一致的。此外，IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性囊腺瘤和卵巢浆液性囊腺癌中均有表达，利用卡方检验分析了三种不同卵巢组织中IL-22和IL-22R1的表达差异，发现卵巢浆液性囊腺癌中的表达阳性率显著高于卵巢浆液性囊腺瘤和正常卵巢组织中的表达阳性率；随后我们采用Spearman分析了卵巢浆液性囊腺癌中IL-22与IL-22R1表达间的相关性，发现，IL-22和IL-22R1的表达呈显著正相关。在一项关于结肠癌的研究中发现了与结肠炎组织相比IL-22和IL-22R1在结肠癌中呈高表达状，该研究也发现IL-22和IL-22R1通过激活磷酸化ERK、INK和MAP3K8，STAT3而实现在肿瘤细胞中的作用[16,17,20]。这个研究结果表明IL-22是通过与IL-22R1的结合在卵巢浆液性囊腺癌中发挥作用的，此外IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌发生发展存在一定的关系，这其中具体的作用机制需要进一步的研究来揭示。其次，我们在进一步分析IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌患者的临床病理特征的关系后，首次发现，IL-22和IL-22R1的高表达与卵巢浆液性囊腺癌的FIGO分期呈正相关，JiangR和LiuT均在相关研究中证实，在原发性肝癌和胃癌中IL-22和IL-22R1表达与手术病理分期呈正相关[21,22]，与我们的研究结果相符，这表明在13 中国医科大学硕士学位论文包括卵巢性浆液性囊腺癌在内的多种恶性肿瘤中，IL-22与IL-22R1均参与恶性肿瘤的侵袭和转移。另外，既往无IL-22及IL-22R1与肿瘤标记物关系的相关报道，但在本研究中首次发现IL-22和IL-22R1的表达与血清CA125水平正相关，这或许是由卵巢恶性肿瘤的生物学特异性所致，也许IL-22及IL-22R1也能作为一种有价值的肿瘤标记物，在辅助诊断卵巢癌和检测卵巢癌的复发的临床实际应用中发挥重要作用。本研究同时还发现，IL-22及IL-22R1的表达与患者年龄和病理分级无明显相关，在两项关于胃癌，肝癌的相关研究中也有相同结果，说明年龄的差异不会导致体内IL-22和IL-22R1表达情况的差异，此外，IL-22和IL-22R1不参与肿瘤分化过程的相关机制。但是为了更加深入的探寻IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌中的作用机制，以期更多发现它们在临床工作中的意义，IL-22和IL-22R1与临床病理因素关系的研究仍然需要广泛且深入的研究。第三，本研究利用Kaplan--Meier曲线和log-rank检验法进行生存分析后发现，在卵巢浆液性囊腺癌中，IL-22和IL-22R1阳性表达组患者的术后生存时间及无瘤生存时间与IL-22和IL-22R1阴性表达组的患者之间无统计学上的差异。我们的这项研究结果与以往的研究有所不同：一项关于胃癌的研究发现IL-22是影响胃癌患者术后5年生存率的独立因素[23]，IL-22的高表达与患者不良的预后相关。之所以出现这种结果差异，考虑跟以下两种原因有关：1、不同类型肿瘤的生物学特性不同，IL-22与IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌患者预后中不能起到重要的影响作用；2、本研究的样本量小及失访率大，会造成一定的抽样误差，因此不足以揭示IL-22和IL-22R1对患者预后的影响。我们的实验没有涉及IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌中的具体作用机制，结合以往的研究，如：L.M.Curd等[24]在对人胰腺癌的研究中发现，在HPAFII细胞中，IL-22可刺激产生血管内皮生长因子（VEGF），抗凋亡因子（Bcl-xL），抑制细胞因子（IL-10和TGF-β1）。并且，IL-22可保护癌细胞避免受到NK细胞介导的细胞毒自然杀伤作用。ZhangW等[25]发现，IL-22可实现抗细胞凋亡作用，通过活化肿瘤细胞和基质细胞中STAT3信号通路及其下游的抗细胞凋亡蛋白，如活化Bcl×l、Bcl2和抑制细胞外信号调节激酶（extracellularsignalregulated1/2,ERK1/2），促进抗凋亡基因的表达。在IL-22-RNAi转染的小鼠体内人类肺癌移植模型中，IL-22可通过上调抗凋亡蛋白来保护人肺癌细胞的存活，同时起到对抗化疗的作用。一项关于乳腺癌的研究发现IL-22通过激活PI3K-AKT-mTOR通路和HOXB-AS5协同促进MDA-MB-231细胞生长、迁移和侵入[26]。我们分析IL-22和IL-22R1在卵巢浆液14 中国医科大学硕士学位论文性囊腺癌中作用可能涉及到的一些分子机制：IL-22和IL-22R1结合，通过刺激肿瘤细胞和基质细胞中STAT3信号通路及其下游的抗细胞凋亡蛋白的活化，促进抗凋亡基因的表达，同时刺激产生血管内皮生长因子，实现抗细胞凋亡作用，从而起到促进肿瘤的生长和转移的的作用。综合以上我们的研究结果发现，卵巢浆液性囊腺癌组织中IL-22和IL-22R1的表达显著高于正常卵巢组织和卵巢浆液性囊腺瘤组织，且卵巢浆液性囊腺癌中IL-22和IL-22R1的表达呈正相关；IL-22和IL-22R1的表达与卵巢浆液性囊腺癌的临床病理分期（FIGO，2009）及CA125水平明显正相关，而与患者的年龄及病理分期没有发现明显相关性；IL-22和IL-22R1高表达组卵巢浆液性囊腺癌患者的术后生存时间及无瘤生存时间与IL-22和IL-22R1低表达组的患者无统计学差异。然而，IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌患者的临床病理特征和预后作用仍需扩大样本量，提高随访率来进一步研究；IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性癌发生发展中的具体作用机制也待揭示；IL-22和IL-22R1在卵巢癌其他组织类型中的作用还需要大量且深入的研究去探索。期待IL-22能够成为有助于卵巢癌早期诊断和监测复发的新的标记物，或者成为卵巢癌治疗的新的作用靶点。15 中国医科大学硕士学位论文5结论IL-22及IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌组织中过表达，并且IL-22与IL-22R1之间的表达呈正相关，除此之外，它们的表达情况与卵巢癌FIGO分期以及CA125水平呈正相关。说明IL-22通过与IL-22R1的结合发挥作用，参与卵巢浆液性囊腺癌的发生发展的过程，并且可作为一种有价值的标记物用来辅助诊断卵巢癌和监测卵巢癌的复发。16 中国医科大学硕士学位论文本研究创新性自我评价IL-22和IL-22R1的表达情况与卵巢浆液性囊腺癌关系的相关研究暂未报道。本研究首次应用免疫组织化学的方法检测了卵巢浆液性囊腺癌患者中IL-22和IL-22R1在卵巢浆液性囊腺癌组织和浆液性囊腺瘤组织中的表达情况，并应用统计学方法分析了IL-22和IL-22R1与卵巢浆液性囊腺癌临床病理因素及预后的关系。17 中国医科大学硕士学位论文参考文献[1]OzolsRF,BookmanMA,ConnollyDC,etal.Focusonepithelialovariancancer.CancerCell2004;5:19-24.[2]RischHA,MarrettLD,JainM,etal.DifferencesinRiskFactorsforEpithelialOvarianCancerbyHistologicTypeResultsofaCase-ControlStudy.AmericanJournalofEpidemiology1996;144:363-372.[3]DumoutierL,LouahedJ,RenauldJC.CloningandcharacterizationofIL-10-relatedTcell-derivedinduciblefactor(IL-TIF),anovelcytokinestructurallyrelatedtoIL-10andinduciblebyIL-9.JournalofImmunology2000;164:1814.[4]KumarP,RajasekaranK,PalmerJM,etal.IL-22:AnEvolutionaryMissing-LinkAuthenticatingtheRoleoftheImmuneSysteminTissueRegeneration.JCancer2013;4:57-65.[5]SonnenbergGF,FouserLA,ArtisD.FunctionalbiologyoftheIL-22-IL-22Rpathwayinregulatingimmunityandinflammationatbarriersurfaces.AdvImmunol2010;107:1-29.[6]PickertG,NeufertC,LeppkesM,etal.STAT3linksIL-22signalinginintestinalepithelialcellstomucosalwoundhealing.TheJournalofexperimentalmedicine2009;206:1465-1472.[7]DumoutierL,LejeuneD,ColauD,etal.CloningandcharacterizationofIL-22bindingprotein,anaturalantagonistofIL-10-relatedTcell-derivedinduciblefactor/IL-22.JImmunol2001;166:7090-7095.[8]ClémentS,StouffsM,BettiolE,etal.Expressionandfunctionofα-smoothmuscleactinduringembryonic-stem-cell-derivedcardiomyocytedifferentiation.JournalofCellScience2007;120:229-238.[9]Ronnov-JessenL,PetersenOW.Afunctionforfilamentousalpha-smoothmuscleactin:retardationofmotilityinfibroblasts.TheJournalofcellbiology1996;134:67-80.[10]MartinJCJ,BeriouG,HeslanM,etal.Interleukin-22bindingprotein(IL-22BP)isconstitutivelyexpressedbyasubsetofconventionaldendriticcellsandisstronglyinducedbyretinoicacid.MucosalImmunology2014;7:101-113.[11]SherbetGV.MetastasispromoterS100A4isapotentiallyvaluablemoleculartargetforcancertherapy.CancerLetters2009;280:15-30.[12]MickeP,OstmanA.Tumour-stromainteraction:cancer-associatedfibroblastsasnoveltargetsin18 中国医科大学硕士学位论文anti-cancertherapy?LungCancer2004;45Suppl2:S163.[13]WolkK,WitteE,WitteK,etal.Biologyofinterleukin-22.Seminarsinimmunopathology2010;32:17-31.[14]EyerichS,WagenerJ,WenzelV,etal.IL-22andTNF-alpharepresentakeycytokinecombinationforepidermalintegrityduringinfectionwithCandidaalbicans.Europeanjournalofimmunology2011;41:1894-1901.[15]ThomassetN,LochterA,SympsonCJ,etal.Expressionofautoactivatedstromelysin-1inmammaryglandsoftransgenicmiceleadstoareactivestromaduringearlydevelopment.AmericanJournalofPathology1998;153:457.[16]KimK,KimG,KimJY,etal.Interleukin-22promotesepithelialcelltransformationandbreasttumorigenesisviaMAP3K8activation.Carcinogenesis2014;35:1352-1361.[17]JiangR,WangH,DengL,etal.IL-22isrelatedtodevelopmentofhumancoloncancerbyactivationofSTAT3.BMCCancer2013;13:59.[18]DenkPO,HoppeJ,HoppeV,etal.EffectofgrowthfactorsontheactivationofhumanTenon'scapsulefibroblasts.CurrEyeRes2003;27:35-44.[19]WangC,GongG,ShehA,etal.Interleukin-22drivesnitricoxide-dependentDNAdamageanddysplasiainamurinemodelofcolitis-associatedcancer.MucosalImmunol2017;10:1504-1517.[20]NaherL,KiyoshimaT,KobayashiI,etal.STAT3signaltransductionthroughinterleukin-22inoralsquamouscellcarcinoma.InternationalJournalofOncology2012;41:1577-1586.[21]JiangR,TanZ,DengL,etal.Interleukin-22promoteshumanhepatocellularcarcinomabyactivationofSTAT3.Hepatology2011;54:900-909.[22]LiuT,PengL,YuP,etal.IncreasedcirculatingTh22andTh17cellsareassociatedwithtumorprogressionandpatientsurvivalinhumangastriccancer.JournalofClinicalImmunology2012;32:1332-1339.[23]ZhuangY,PengLS,ZhaoYL,etal.IncreasedintratumoralIL-22-producingCD4(+)TcellsandTh22cellscorrelatewithgastriccancerprogressionandpredictpoorpatientsurvival.CancerImmunology,Immunotherapy2012;61:1965.[24]CurdLM,FavorsSE,GreggRK.Pro-tumouractivityofinterleukin-22inHPAFIIhumanpancreaticcancercells.Clinicalandexperimentalimmunology2012;168:192-199.[25]ZhangW,ChenY,WeiH,etal.Antiapoptoticactivityofautocrineinterleukin-22andtherapeutic19 中国医科大学硕士学位论文effectsofinterleukin-22-smallinterferingRNAonhumanlungcancerxenografts.Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch2008;14:6432-6439.[26]RuiJ,ChunmingZ,BinbinG,etal.IL-22promotestheprogressionofbreastcancerthroughregulatingHOXB-AS5.Oncotarget2017;8:103601-103612.20 中国医科大学硕士学位论文综述IL-22在炎症性疾病与恶性肿瘤中的研究进展白细胞介素-22（IL-22）是IL-10细胞因子家族的成员之一。它参与机体防御病毒感染，介导慢性炎症、自身免疫疾病，和肿瘤发生发展等多个生理或病理进程。IL-22的信号是通过由两种亚基——特定受体IL-22R1和共享亚基IL-10R2组成的异二聚体跨膜受体传导的。IL-22主要由CD4+T辅助细胞17(Th17)、Th22细胞、CD8+细胞毒性T细胞、自然杀伤(NK)细胞、淋巴组织诱导r(LTi)-样细胞以及γδT细胞产生。现有的研究已经表明，IL-22在炎性疾病和恶性肿瘤的发病及转移机制中起到重要作用。本文主要对IL-22的来源、结构、功能、信号通路以及其在各种炎性疾病及恶性肿瘤中的作用进行综述。1.IL-22的来源，基因与蛋白结构白细胞介素-22（IL-22）是最先于2000年由Dumoutieri等用IL-9刺激T淋巴瘤细胞系所发现的IL-10细胞因子家族成员之一[1]。人体内IL-22表达主要是由几种T淋巴细胞亚群产生，这些亚群包括CD4+T辅助细胞17(Th17)、Th22细胞、CD8+细胞毒性T细胞,、自然杀伤(NK)细胞、淋巴组织诱导r(LTi)-样细胞和γδT细胞，但在巨噬细胞、成熟或不成熟DC及非免疫细胞中都没发现IL-22的表达。人白细胞介素-22(hIL-22)的基因是一个单拷贝基因，其定位于12号染色体的长臂上，DNA片段长约6Kb，与IL-10之间的氨基酸序列有22％的同源性。IL-22蛋白由179个氨基酸构成，与人IL-21存在78%的同源性，并且与人IL-10R存在25%的同源性[2]。2.IL-22的受体以及信号通路IL-22的信号是通过由两种亚基组成的异二聚体跨膜受体来传导的，这两种亚基分别是特定受体IL-22R1和共享亚基IL-10R2[3]。IL-10R2可普遍表达于各种细胞。IL-22R1选择性表达于上皮细胞如角质形成细胞、肝细胞、胰腺细胞、肺细胞、肾脏细胞和结肠上皮细胞等，但在免疫细胞中不表达[4]。因此，IL-22结合的特异性由IL-22R1决定。此外，IL-22虽然由免疫细胞产生的，但是并不作用于免疫细胞，它的主要功能是调节其他组织细胞。研究已证实，IL-22首先结合到IL-22R1的胞外高亲和力的结构域上，引起空间21 中国医科大学硕士学位论文构象改变，形成IL-22/IL-22R1异二聚异体，然后IL-10R2再顺序性识别并结合到这个异二聚体上。IL-22与受体结合后主要活化JAK蛋白酪氨酸激酶／信号传导子和转录激活子（JanusKinasesignaltransducerandactivatoroftranscription，JAK/STAT）信号通路[5]。研究发现，在H4IIE小鼠模型中，IL-22与肝肿瘤细胞株表面受体结合后，使JAK和酪氨酸激酶2快速激活，进而使STAT、STAT3和STAT5磷酸化。此外，IL-22也可激活3个主要的丝裂原活化蛋白激酶（mitogenactivatedproteinkinase，MAPK）信号通路，包括MEK、ERK、RSK通路、JNK/SAPK通路和P38激酶通路[6]。3.IL-22在炎症相关性疾病中的研究新进展目前已经发现白细胞介素-22与许多炎症相关性疾病有密切关系，现将IL-22在炎症性肠病、自身免疫性皮肤病以及其它炎症相关性疾病中的作用作如下总结。3.1IL-22在自身免疫性皮肤病中的研究IL-10R2在各种组织细胞中广泛表达，而IL-22R1仅在上皮细胞高表达，因此IL-22的主要靶细胞极有可能是上皮细胞。IL-22在与其他细胞的相互作用下可以产生多种炎性因子和抗菌肽[7]。IL-22在自身免疫性皮肤病的发病过程可起到重要作用。Wolk等[8]在研究发现，在斑块状银屑病患者中，IL-22在皮肤组织以及血浆中的表达呈显著增加，而经过治疗后，患者血浆中IL-22的表达呈显著降低。这表明IL-22参与了自身免疫性皮肤病的致病过程中。此外，另一项关于银屑病的研究发现，IL-23也在致病过程中发挥着重要作用[9]。3.2IL-22在炎症性肠病中的研究Brand等[10]在研究中发现，在克罗恩病中IL-22呈显著高表达，并且IL-22可作用于肠上皮细胞，进而促进促炎因子IL-8和TNF-α的表达。近期Schmechel等[11]也在研究中发现，在克罗恩病患者中，血清IL-22的表达水平高低与疾病是否活动相关，此外，IL-22的表达情况与IL-23R基因多态性也显著相关。3.3IL-22在其他疾病中的研究在IL-22注射后的小鼠肝脏中，产生了类似急性期的反应蛋白，随着LPS的注射，小鼠体内IL-22的表达呈现出快速上升趋势，这提示IL-22参与了小鼠体内的炎性反应[12]。在一些疾病中，IL-22还表现出了组织修复的能力。Zenewicz等[13]在研究中发现，在急性肝炎中，Th17细胞分泌的IL-22可保护肝细胞，Chang等[14]发现，在实验性自身免疫性心肌炎中，IL-22可起到保护心肌细胞的作用。4.IL-22与肿瘤关系研究新进展22 中国医科大学硕士学位论文由于炎症因子在许多方面都与肿瘤微环境有关，如流行病学、组织病理学和炎症等，炎症因子在恶性肿瘤发生发展中的作用开始得到诸多研究者的关注。目前研究发现，IL-22在多种恶性肿瘤的外周血和肿瘤组织中均过表达，可作为有效指标用来评估肿瘤疗效、指导治疗及判断预后。4.1肺癌ZhangW等[15]在非小细胞肺癌的研究中发现，IL-22在肿瘤组织、恶性胸腔积液和人非小细胞肺癌血清中高表达；与正常组相比，非小细胞肺癌患者IL-22mRNA水平显著升高，这表明IL-22与人类非小细胞肺癌的发生发展密切相关。此外还发现，通过活化肿瘤细胞和基质细胞中的STAT3信号通路及下游抗凋亡蛋白，IL-22可促进抗凋亡基因的表达，如活化Bcl×l、Bcl2和抑制胞外信号调节激酶（extracellularsignalregulated1/2,ERK1/2），来实现其抗细胞凋亡作用。在IL-22-RNAi转染的小鼠体内人类肺癌移植模型中，ZhangW等发现，IL-22通过上调抗凋亡蛋白可保护人肺癌细胞的存活，同时还可起到对抗化疗的作用。此外，与外周血相比较IL-22在恶性胸腔积液中的含量明显增高，且在人肺腺癌细胞株A549中，IL-22可促进细胞增殖，同时抑制由IFNγ诱导的细胞凋亡[16]。还有学者研究发现，复发性小细胞肺癌的IL-22和IL-22R1表达水平高于原发肿瘤[17]，另外，缘于STAT3和AKT更强程度的活化，肺癌细胞系也表现出了更强的侵袭和生存能力，而在敲除IL-22R1基因后，肺癌细胞系更强的侵袭和生存能力的表现也同时消失。基因连锁分析发现IL-22位点的SNPs与NSCLC相关。一个SNP与腺癌亚型晚期非细胞肺癌的2倍增加有关。在IL22的位点有许多不同的SNPs的患者有更高的IL-22血浆水平[18]。4.2肾癌FengboZhang等对A498细胞系加入外源性IL-22进行处理，发现细胞生长受到抑制，且IL-22与细胞抑制程度呈剂量依赖关系，这种抑制作用涉及诱导G2/M细胞周期阻滞。通过WSTERN技术检测细胞内信号通路，发现STAT1和ERK1/2的磷酸化程度明显衰减。表明，IL-22是通过调剂STAT1信号和阻滞G2/M期细胞周期而产生的作用[19]。4.3结肠癌Jiang等人在研究中发现，IL-22及其特异性受体IL-22R1在人类结肠癌组织和溃疡性结肠炎组织中高表达，且IL-22的表达与结肠癌肿瘤体积呈正相关；此外，在结肠癌组织中检测到IL-22可激活STAT3磷酸化，这表明IL-22通过STAT3的活化抑制癌细胞凋亡，从而起到促进肿瘤的生长和转移的的作用[20]。研究还发现，23 中国医科大学硕士学位论文IL-22的水平与结直肠癌的手术病理分期呈正相关[21]，表明IL-22可能与肿瘤的生长和恶性程度相关联；与化疗非耐药的患者相比，耐药患者的血清IL-22有更高水平的表达[22]，这表明IL-22可能参与肿瘤化疗耐药机制。4.4肝癌Jiang等[23]发现，IL-22在人类肝细胞癌中呈高表达，此外，与正常组织中的白细胞相比，肝癌细胞浸润的白细胞中IL-22的表达水平更高；IL-22在Ⅲ～Ⅳ期患者中的表达显著高于I～Ⅱ期的患者，这表明IL-22可能与肿瘤的生长和恶性程度相关联；与正常组织相比，IL-22相关细胞因子TNFα3在肝细胞癌和癌旁肝硬化组织中呈高表达，STAT3的磷酸化也明显增加。在小鼠的肝癌模型中也可观察到，IL-22的表达激活STAT3通路，IL-22的表达和肝脏互补增殖之间证实有线性关系。总之肝癌微环境中IL-22过度表达，促进肿瘤细胞的生长，抑制其凋亡，并且通过STAT3的活化来促进肿瘤转移。与此研究结果相反，另一项研究则发现IL-22在肝癌经导管动脉内化疗栓塞（TACE）治疗早期阶段的肝损伤中有保肝作用[24]。因此,IL-22在肝癌中发挥的作用仍存在争议。4.5口腔鳞状细胞癌Naher等[25]发现，IL-22R在口腔鳞状细胞癌和颈部转移的淋巴结中与正常组织相比呈明显高表达。RT-PCR显示人口腔鳞癌细胞株MISK81-5,HSC-3,HSC-4,SASandSQUU-B均可表达IL-22受体链，另外在口腔鳞状细胞癌的MISK81-5细胞系中IL-22可诱使STAT3瞬时磷酸化，然而在HSC-3细胞系中则检测不到这种反应。进一步研究发现，IL-22还可上调鳞状细胞癌标志物SERPINB3/4的表达。这些结果表明，IL-22通过STAT3依赖和非依赖途径，在口腔鳞状细胞癌的生长、细胞分化和进展中发挥重要作用。4.6胰腺癌L.M.Curd等[26]在对人胰腺癌的研究中发现，在HPAFII细胞中，IL-22可刺激产生血管内皮生长因子（VEGF），抑制细胞因子（IL-10和TGF-β1）和抗凋亡因子（Bcl-xL）；并且，IL-22可保护胰腺癌细胞，避免其受到NK细胞介导的细胞毒自然杀伤作用。这些研究结果表明，在人胰腺癌细胞中，IL-22主要通过促进肿瘤的发病机制而非抗肿瘤免疫功能来发挥作用。4.7乳腺癌Weber等[27]研究EMT6小鼠乳腺癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期发现，通过抑制ERK1/2信号通路以及丝氨酸苏氨酸蛋白激酶的磷酸化，IL-22可减少肿瘤细胞的24 中国医科大学硕士学位论文生长及增殖。Kim[28]等研究发现，IL-22的水平与MAP3K8和Pin1在人乳腺癌组织中的表达呈正相关，而敲除MAP3K8andPin1可使MCF7细胞致瘤性降低，这个结果表明MAP3K8和Pin1可能是乳腺癌发生发展的重要分子靶点。4.8膀胱癌TaoZhao等[29]做了一项关于膀胱癌风险与IL-22基因多态性的前瞻性病例对照研究，研究发现，与健康对照组相比，膀胱癌患者的IL-22-429TT基因型比值比更高。根据膀胱癌病理分期进一步研究分析发现，浅表膀胱癌患者的IL-22-429TT基因型频率明显较低。这表明，IL-22基因多态性与患膀胱癌的几率以及膀胱癌的进展密切相关。4.9胃癌Liu等[30]研究发现，胃癌患者术前外周血中IL-22T+细胞水平相较正常对照组明显增高，并且IL-22在Ⅲ～Ⅳ期胃癌患者中的表达显著高于I～Ⅱ期，这表明IL-22可能与胃癌的发生进展密切相关。Zhuang等[31]在研究中发现Th22细胞和IL-22+CD4+T细胞在肿瘤组织中的比例明显高于肿瘤引流淋巴结、非肿瘤组织以及癌旁组织，并与肿瘤的TNM分期呈正相关；此外还发现，Th22细胞和IL-22+CD4+T细胞百分比高水平患者的21月生存率低水平患者的21月生存率显著降低，这表明IL-22可能参与胃癌的发生发展，并影响患者预后。4.10人胶质母细胞瘤HusseinAki[32]在研究中发现，在人胶质母细胞瘤中IL-22的两个亚基均有表达。对人胶质母细胞瘤加入外源IL-22处理，发现，AKT磷酸化水平，STAT3信号转导蛋白及其下游抗凋亡蛋白都显著增加，同时ERK1/2的磷酸化水平降低。说明IL22/IL-22R通路在诱导人胶质母细胞瘤存活中起重要作用。4.11甲状腺癌IL-22基因启动子中的一个SNP被发现与200%的甲状腺癌的发生风险有关。然而,IL-22R1中的SNP没有显示与任何疾病相关[33]。最近的一项研究表明，甲状腺癌的侵袭性是由IL-22引起的，其涉及的分子机制可能如下，IL-22诱导miR-595表达，直接诱导Sox17mRNA降解，敲除miR-595可减少甲状腺癌细胞的侵袭和迁移[34]。4.12前列腺癌JordanShafran[35]在研究中发现，IL-22可增加雄激素非依赖性前列腺癌的迁移和侵袭能力，这种表现是通过STAT3的激活来实现的。25 中国医科大学硕士学位论文5.结语与展望综上所述，IL-22细胞因子作为一种新兴的CD4+Th细胞因子，在恶性疾病中所起的作用已经渐渐被人们了解，但仍有许多问题尚需进一步研究，如，除了以上总结的恶性肿瘤外，IL-22是否也在其他系统的恶性肿瘤中发挥重要作用。关于IL-22在恶性肿瘤中的治疗作用研究亦尚缺乏，从而限制了其在临床工作中的实际应用，此外，在某些恶性肿瘤中，IL-22表现出的双重作用也值得我们深入研究。总之，通过这些问题的解决，可以完善在恶性肿瘤疾病中发现的IL-22现有的作用机制，以期为各种恶性肿瘤疾病的预防和治疗开辟新的途径。参考文献[1]DumoutierL,LouahedJ,RenauldJC.CloningandcharacterizationofIL-10-relatedTcell-derivedinduciblefactor(IL-TIF),anovelcytokinestructurallyrelatedtoIL-10andinduciblebyIL-9.Journalofimmunology2000;164:1814-1819.[2]PickertG,NeufertC,LeppkesM,etal.STAT3linksIL-22signalinginintestinalepithelialcellstomucosalwoundhealing.TheJournalofexperimentalmedicine2009;206:1465-1472.[3]BleicherL,deMouraPR,WatanabeL,etal.CrystalstructureoftheIL-22/IL-22R1complexanditsimplicationsfortheIL-22signalingmechanism.FEBSletters2008;582:2985-2992.[4]WolkK,KunzS,WitteE,etal.IL-22increasestheinnateimmunityoftissues.Immunity2004;21:241-254.[5]WolkK,WitteE,WitteK,etal.Biologyofinterleukin-22.Seminarsinimmunopathology2010;32:17-31.[6]EyerichS,WagenerJ,WenzelV,etal.IL-22andTNF-alpharepresentakeycytokinecombinationforepidermalintegrityduringinfectionwithCandidaalbicans.Europeanjournalofimmunology2011;41:1894-1901.[7]SaSM,ValdezPA,WuJ,etal.TheeffectsofIL-20subfamilycytokinesonreconstitutedhumanepidermissuggestpotentialrolesincutaneousinnatedefenseandpathogenicadaptiveimmunityinpsoriasis.JImmunol2007;178:2229-2240.[8]WolkK,WitteE,WallaceE,etal.IL-22regulatestheexpressionofgenesresponsibleforantimicrobialdefense,cellulardifferentiation,andmobilityinkeratinocytes:apotentialroleinpsoriasis.Europeanjournalofimmunology2006;36:1309-1323.[9]CargillM,SchrodiSJ,ChangM,etal.Alarge-scalegeneticassociationstudyconfirmsIL12B26 中国医科大学硕士学位论文andleadstotheidentificationofIL23Raspsoriasis-riskgenes.Americanjournalofhumangenetics2007;80:273-290.[10]BrandS,BeigelF,OlszakT,etal.IL-22isincreasedinactiveCrohn'sdiseaseandpromotesproinflammatorygeneexpressionandintestinalepithelialcellmigration.AmericanjournalofphysiologyGastrointestinalandliverphysiology2006;290:G827-838.[11]SchmechelS,KonradA,DiegelmannJ,etal.LinkinggeneticsusceptibilitytoCrohn'sdiseasewithTh17cellfunction:IL-22serumlevelsareincreasedinCrohn'sdiseaseandcorrelatewithdiseaseactivityandIL23Rgenotypestatus.Inflammatoryboweldiseases2008;14:204-212.[12]DumoutierL,VanRoostE,AmeyeG,etal.IL-TIF/IL-22:genomicorganizationandmappingofthehumanandmousegenes.Genesandimmunity2000;1:488-494.[13]ZenewiczLA,YancopoulosGD,ValenzuelaDM,etal.Interleukin-22butnotinterleukin-17providesprotectiontohepatocytesduringacuteliverinflammation.Immunity2007;27:647-659.[14]ChangH,HanawaH,LiuH,etal.Hydrodynamic-baseddeliveryofaninterleukin-22-Igfusiongeneamelioratesexperimentalautoimmunemyocarditisinrats.JImmunol2006;177:3635-3643.[15]ZhangW,ChenY,WeiH,etal.Antiapoptoticactivityofautocrineinterleukin-22andtherapeuticeffectsofinterleukin-22-smallinterferingRNAonhumanlungcancerxenografts.Clinicalcancerresearch:anofficialjournaloftheAmericanAssociationforCancerResearch2008;14:6432-6439.[16]YeZJ,ZhouQ,YuanML,etal.DifferentiationandrecruitmentofIL-22-producinghelperTcellsstimulatedbypleuralmesothelialcellsintuberculouspleurisy.Americanjournalofrespiratoryandcriticalcaremedicine2012;185:660-669.[17]BiY,CaoJ,JinS,etal.Interleukin-22promoteslungcancercellproliferationandmigrationviatheIL-22R1/STAT3andIL-22R1/AKTsignalingpathways.MolCellBiochem2016;415:1-11.[18]LiuF,PanX,ZhouL,etal.Geneticpolymorphismsandplasmalevelsofinterleukin-22contributetothedevelopmentofnonsmallcelllungcancer.DNAandcellbiology2014;33:705-714.[19]ZhangF,ShangD,ZhangY,etal.Interleukin-22suppressesthegrowthofA498renalcellcarcinomacellsviaregulationofSTAT1pathway.PloSone2011;6:e20382.[20]JiangR,WangH,DengL,etal.IL-22isrelatedtodevelopmentofhumancoloncancerbyactivationofSTAT3.BMCcancer2013;13:59.27 中国医科大学硕士学位论文[21]PetanidisS,AnestakisD,ArgyrakiM,etal.DifferentialexpressionofIL-17,22and23intheprogressionofcolorectalcancerinpatientswithK-rasmutation:RassignalinhibitionandcrosstalkwithGM-CSFandIFN-gamma.PloSone2013;8:e73616.[22]WuT,CuiL,LiangZ,etal.ElevatedserumIL-22levelscorrelatewithchemoresistantconditionofcolorectalcancer.Clinicalimmunology2013;147:38-39.[23]JiangR,TanZ,DengL,etal.Interleukin-22promoteshumanhepatocellularcarcinomabyactivationofSTAT3.Hepatology2011;54:900–909.[24]KimMJ,JangJW,OhBS,etal.Changeininflammatorycytokineprofilesaftertransarterialchemotherapyinpatientswithhepatocellularcarcinoma.Cytokine2013;64:516-522.[25]NaherL,KiyoshimaT,KobayashiI,etal.STAT3signaltransductionthroughinterleukin-22inoralsquamouscellcarcinoma.Internationaljournalofoncology2012;41:1577-1586.[26]CurdLM,FavorsSE,GreggRK.Pro-tumouractivityofinterleukin-22inHPAFIIhumanpancreaticcancercells.Clinicalandexperimentalimmunology2012;168:192-199.[27]WeberGF,GaertnerFC,ErlW,etal.IL-22-mediatedtumorgrowthreductioncorrelateswithinhibitionofERK1/2andAKTphosphorylationandinductionofcellcyclearrestintheG2-Mphase.Journalofimmunology2006;177:8266-8272.[28]KimK,KimG,KimJY,etal.Interleukin-22promotesepithelialcelltransformationandbreasttumorigenesisviaMAP3K8activation.Carcinogenesis2014;35:1352-1361.[29]ZhaoT,WuX,LiuJ.Associationbetweeninterleukin-22geneticpolymorphismsandbladdercancerrisk.Clinics2015;70:686-690.[30]LiuT,PengL,YuP,etal.IncreasedcirculatingTh22andTh17cellsareassociatedwithtumorprogressionandpatientsurvivalinhumangastriccancer.JournalofClinicalImmunology2012;32:1332-1339.[31]ZhuangY,PengLS,ZhaoYL,etal.IncreasedintratumoralIL-22-producingCD4(+)TcellsandTh22cellscorrelatewithgastriccancerprogressionandpredictpoorpatientsurvival.CancerImmunology,Immunotherapy2012;61:1965.[32]AkilH,AbbaciA,LalloueF,etal.IL22/IL-22Rpathwayinducescellsurvivalinhumanglioblastomacells.PloSone2015;10:e0119872.[33]EunYG,ShinIH,LeeYC,etal.Interleukin22polymorphismsandpapillarythyroidcancer.Journalofendocrinologicalinvestigation2013;36:584-587.[34]MeiZ,ZhouL,ZhuY,etal.Interleukin-22promotespapillarythyroidcancercellmigrationand28 中国医科大学硕士学位论文invasionthroughmicroRNA-595/Sox17axis.Tumourbiology:thejournaloftheInternationalSocietyforOncodevelopmentalBiologyandMedicine2016;37:11753-11762.[35]ShafranJ,AndrieuG,DenisGV.IL-22IncreasesMetastaticPropertiesinAndrogen-IndependentProstateCancer.2017.29 中国医科大学硕士学位论文攻读学位期间科研成果在投30 中国医科大学硕士学位论文致谢时光飞逝，在中国医科大学的学习的三年使我获益良多。研究生期间一步一步地走来，有许多师长，前辈，同学给予了我热心的指导和无私的帮助。在此，对你们送上我最诚挚的感谢和祝福。首先，我由衷地感谢我的导师，佟晓光教授。老师在我科研和临床的研究与学习上倾注了大量的心血，使我受益匪浅。不论是工作中实事求是，精益求精的态度，还是生活中积极向上，乐于助人的品德，都为我树立了榜样。不止是这三年的学习生活，乃至对我一生的职业道路都受益匪浅。其次，感谢一路上给予我指导的各科老师，师兄师姐和同学们，特别是中国医科大学附属第一医院妇科的所有老师和同学。在你们的帮助和支持下，我才能顺利地完成我三年的研究生生涯。最后，感谢我的父母家人以及朋友们。是你们让我有了不竭的动力在学习中奋斗。31 中国医科大学硕士学位论文个人简介姓名：崔静恩性别：女民族：汉学习经历：2010年9月—2015年7月重庆医科大学临床医学专业本科2015年9月—2018年7月中国医科大学妇产科学专业硕士研究生32