实验性肝癌中影响ppt课件

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1、实验性肝癌中比较槐耳与IL-2对PTEN和IL-2R阳性细胞的影响1前言肝癌是我国第三位恶性肿瘤，约占全世界肝癌病例的42.5%。该病病程短、进展快、病死率高，严重危害着我国人民的健康和生命。槐耳清膏是一种入药1500年但湮没已300余年的重要药用菌，作为一种治疗肝癌的药用菌，在民间早已有应用。槐耳清膏标本经鉴定学名为TrametesRobiniophilaMurr.，中文名为槐栓菌。2PTEN(与细胞骨架蛋白tensin同源在肿瘤的10号染色体有缺失的磷酸酯酶)是定位于10q23的一种具有磷酸酯酶活性的抑癌基因，PTEN蛋白能够抑制肿瘤的浸润和转移，诱导细胞凋亡和阻滞细胞周期。IL-2被称

2、为T细胞生长因子。IL-2主要以自分泌或旁分泌的方式，诱导特异性CTL克隆增殖，杀伤肿瘤细胞。3本课题拟通过诱癌剂诱导大鼠肝癌，并通过应用槐耳清膏和IL-2干预癌形成过程，诱癌20周后观察肝组织的病理变化、IL-2R阳性细胞的表达情况以及PTEN表达水平，从而探讨与比较槐耳与IL-2对于肝癌形成与发展的影响，及其可能的作用机制。4材料与方法1研究对象2主要试剂3方法40只雄性SD大鼠（本校实验动物中心）5动物实验试剂二乙基亚硝胺（DENA，Sigma公司）、金克-槐耳清膏（江苏启东盖天力药业有限公司）、注射用重组人IL-2（江苏金丝利药业有限公司）。6免疫组化试剂IL-2R/CD25α链单克

3、隆抗体（NeoMarkers公司）、即用型免疫组化二步法染色试剂盒（福州迈新KIT-9801）。7RT-PCR试剂RT试剂盒（上海生工生物技术服务有限公司）PCR试剂盒（上海生工生物技术服务有限公司）100bpDNAladder（华美生物工程公司）PTEN引物（上海生工生物技术服务有限公司）内参GAPDH引物（上海生工生物技术服务有限公司）81)动物实验2)常规切片制作3)HE染色及镜下观察4)免疫组织化学染色检测IL-2R阳性细胞5)RT-PCR检测PTEN表达6)统计分析940只正常雄性SD大鼠，体重100—120g。大鼠置普通级动物实验室饲养，标准饲料喂养及自由饮水，气温20～25℃，

4、湿度为50-60%，2-3只/笼10实验分组①正常对照组(G1)②单纯诱癌组(G2)③诱癌加槐耳清膏组(G3)④诱癌九周后槐耳清膏组(G4)④诱癌九周后IL-2组(G5)生理盐水DENADENA+九周后槐耳清膏DENA+九周后IL-2DENA+槐耳清膏11DENA灌胃，70mg/kg，每周一次，连续用药15周后停药12免疫组化二步法抗原修复：柠檬酸盐缓冲液（pH6.0）煮沸20minIL-2Rα链单克隆抗体（工作浓度：1︰400）37℃孵育30min，4℃过夜捷达形态分析系统计数IL-2R阳性细胞数13PCR执行程序：94℃，2min→94℃，40秒（变性）↙32次↖56℃，40s→72℃，

5、40s→72℃，5min→4℃（复性）（延伸）（总延伸）第10个循环结束后（停留在72℃，提前10秒）暂停，PCR反应体系中加入内参GAPDH引物2.0μl后同管扩增。14PCR产物1%琼脂糖凝胶电泳四星凝胶图像分析系统测定条带密度PTEN的相对表达量=(LP-LB)/(LG-LB)LPPTEN条带密度LGGAPDH条带密度LB背景密度15Stata6.0统计软件多组等级资料秩和检验（Kruskal-Wallis法）率的比较卡方检验两样本均数的比较t检验多个样本均数的比较单因素方差分析两变量依存关系直线相关分析检验水准α＝0.0516结果1病理观察2免疫组化结果观察3RT-PCR检测PTEN

6、表达4比较IL-2R阳性细胞数与PTEN相对表达量的关系171)各组大鼠肝脏病理观察2)各组鼠肝组织正常、不典型增生与癌形成的比较3)各组癌形成率的比较18正常对照组，HE染色×25019单纯诱癌组，癌形成伴有明显坏死HE染色×25020诱癌加槐耳清膏组，不典型增生结节HE染色×25021诱癌加九周后槐耳清膏组卵圆细胞增生HE染色×25022诱癌加九周后IL-2组以透明细胞为主的增生伴癌结节形成HE染色×25023各组中组织切片正常、不典型增生与癌形成的比较24百分率（％）组别秩和检验：χ2=20.053（p＝0.0005）25组间比较各组癌形成率（卡方检验）G1234-------

7、---

8、------------------------------------------------------------------2

9、10.370

10、0.001

11、3

12、1.4365.333

13、0.2310.021

14、4

15、2.6373.8990.258

16、0.1040.0480.612

17、5

18、2.6373.8990.2580.000

19、0.1040.0480.6121.000261)IL-2R阳性细胞的特征与分布2)各组大