组蛋白去甲基化酶Jmjd3调节牙周膜细胞向成骨细胞分化的研究

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1、分类号：R781.3单位代码：10159密级：公开学号：201521170硕士学位论文（临床医学硕士科学学位）中文题目：组蛋白去甲基化酶Jmjd3调节牙周膜细胞向成骨细胞分化的研究英文题目：TheroleofhistonedemethylaseJmjd3regulatingperiodontalligamentcellsdifferentiateintoosteoblasts论文作者：于博指导教师：仇丽鸿教授学科专业：口腔临床医学完成时间：2018年2月中国医科大学硕士学位论文组蛋白去甲基化酶Jmjd3调节牙周膜细胞向成骨细胞分化的研究Theroleof

2、histonedemethylaseJmjd3regulatingperiodontalligamentcellsdifferentiateintoosteoblasts论文作者于博指导教师仇丽鸿教授申请学位医学硕士培养单位口腔医学院一级学科口腔医学二级学科口腔临床医学研究方向牙体牙髓病学论文起止时间2017年10月—2018年2月论文完成时间2018年2月中国医科大学（辽宁）2018年2月I中国医科大学学位论文独创性声明本人郑重声明：本论文是我个人在导师指导下独立进行的研究工作及取得的研究成果，论文中除加以标注的内容外，不包含其他人或机构已经发表或撰写

3、过的研究成果，也不包含本人为获得其他学位而使用过的成果。对本研究提供贡献的其他个人和集体均已在文中进行了明确的说明并表示谢意。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。论文作者签名：日期：2018年5月9日中国医科大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的原件、复印件和电子版，允许学位论文被查阅和借阅。本人授权中国医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编学位论文。保密（），在年后解密适用本授权书。（保

4、密：请在括号内划“√”）论文作者签名：指导教师签名：日期：2018年5月9日日期：2018年5月9日II中国医科大学硕士学位论文摘要目的：慢性根尖周炎是造成根尖周骨组织破坏的主要疾病之一，研究证实组蛋白甲基化与干细胞分化密切相关。本研究的目的是探讨组蛋白去甲基化酶含十字形结构域蛋白-3(Jumonjidomain-containing3，Jmjd3)对牙周膜细胞向成骨细胞分化的影响。方法：来源于人乳牙的牙周膜细胞系SH-9细胞在含50µg/ml抗坏血酸（L-ascorbicacid，L-ASA）和6mMβ-甘油磷酸盐（β-glycerophosphate

5、，β-GP）的促成骨分化培养液中培养（0、3、7、10d），采用real-timeRT-PCR检测SH-9细胞中Jmjd3及成骨分化标志基因Runt相关转录因子2（runt-relatedtranscriptionfactor2，RUNX2）、Osterix和骨钙素（Osteocalcin，OCN）mRNA的表达，采用WesternBlot检测SH-9细胞中Jmjd3蛋白的表达。以不同浓度（0、1、10µM）Jmjd3去甲基化酶活性抑制剂GSK-J4预处理细胞2h后，在促成骨分化培养液中培养SH-9细胞3d，real-timeRT-PCR检测GSK-J4

6、对成骨分化标志基因RUNX2、Osterix、OCNmRNA表达的影响。采用小干扰RNA(SmallinterferingRNA，siRNA)转染SH-9细胞，建立对照组（siCont）和Jmjd3沉默组（siJmjd3），在促成骨分化培养液中培养3d后，real-timeRT-PCR检测RUNX2、Osterix、OCNmRNA的表达。采用pH4.3、60mM茜素红(AlizarinRedS,ARS)染色，检测沉默Jmjd3后对细胞矿化结节形成水平的影响。采用SPSS18.0软件包对结果进行单因素方差分析和Dunnettt检验。结果：在促成骨分化培养后

7、，SH-9细胞中成骨分化标志基因RUNX2、Osterix、OCNmRNA表达增加，Jmjd3的表达显著增加，7d时mRNA的表达量最高（P<0.01）。Jmjd3蛋白表达也增加，7d时蛋白表达量最高（P<0.01）。在促成骨分化培养液中加入GSK-J4后，RUNX2、Osterix、OCNmRNA表达受到抑制（P<0.05）。采用小干扰RNA转染SH-9细胞，沉默Jmjd3时，成骨分化标志基因RUNX2、Osterix、OCN的表达受到抑制（P<0.01），细胞矿化结节形成水平降低。结论：Jmjd3在牙周膜细胞向成骨细胞诱导分化过程中发挥正向调节作用且

8、与Jmjd3酶活性相关。关键词：组蛋白去甲基化酶；Jmjd3；成骨分化；牙周膜细