欢迎来到天天文库
浏览记录
ID:1774346
大小:30.50 KB
页数:6页
时间:2017-11-13
《医药学医学毕业论文 罗红霉素干混悬剂微生物限度检查法的建立与验证》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号:XXXXXXXXX姓名:XXX专业:医药学医学论文题目:罗红霉素干混悬剂微生物限度检查法的建立与验证指导老师:XXX二〇一一年十二月十日作者:雷柳冰巫彬毅曾丽玲【摘要】目的建立罗红霉素干混悬剂微生物限度检查法与验证。方法薄膜过滤法,用含5%乙醇的0.1%蛋白胨溶液500ml分5次冲洗滤膜。结果各控制菌回收率均在70%以上。结论该方法可行。【关键词】罗红霉素干混悬剂微生物限度薄膜过滤法罗红霉素干混悬剂为半合成的14元环大环内脂类抗生素,适用于化脓性链球菌引起的咽炎及扁桃体炎,敏感菌所致的鼻窦炙、中耳炎、急性支气管炎、慢性
2、支气管炎急性发作,肺炎支原体或肺炎衣原体所致的肺炎,沙眼衣原体引起的尿道炎和宫颈炎,敏感细菌引起的皮肤软组织感染[1]。本实验采用薄膜过滤法,用含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液冲洗滤膜,对该品种进行微生物限度检查,各控制菌回收率在70%以上,表明该方法可行。?1仪器与试药1.1仪器:HTY-2000集菌仪、集菌培养器(孔径为0.45μm),HH.BII.420电热恒温培养箱、LRH-250A生化培养箱、SartoriusBS2002S电子天平、SA-1480-Ⅱ净化工作台。1.2培养基:营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、营养肉汤培
3、养基、MUG培养基,均购于中检所。1.3菌种:枯草芽孢杆菌CMCC(B)63501、金黄色葡萄球菌CMCC(B)26003、大肠埃希菌CMCC(B)44102、白色念珠菌CMCC(F)98001、黑曲霉CMCC(F)98003(以上菌株均为第三代),均购于中检所。1.4菌液制备1.4.1取经30℃~35℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌营养肉汤培养液1ml,加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50~100cfu。1.4.2取经23℃~28℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁培养液1ml,加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50
4、~100cfu。1.4.3取经23℃~28℃培养5~7天的黑曲霉改良马丁营养琼脂斜面,用0.9%无菌氯化钠3~5ml将孢子洗脱,加0.9%无菌氯化钠至每ml含菌50~100cfu2实验方法2.1细菌霉菌及酵母菌检查方法的验证2.1.1供试液的制备取供试品10g,加pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100g,作为1:10的供试液。2.1.2方法验证过程验证试验进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌的回收率。2.1.2.1实验组取1:10供试液1ml,加入50ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中,摇匀,立刻过滤,滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%
5、无菌蛋白胨溶液冲洗后,用注射器加入菌液1ml,滤干,取滤膜培养。每株菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉)各做1份试验。2.1.2.2菌液组取菌液1ml加入平皿中,立刻加入相应的琼脂,各菌株做2份平行试验。2.1.2.3供试品对照组按试验组的方法不加菌液,测定供试品的本底菌数。2.1.2.4稀释剂对照组取上述菌液(枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉)各1ml,加入50ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中,滤过,滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液分5次冲洗后,滤干。取滤膜培养。
6、每株菌株(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉)各做1份试验。2.1.3计算公式实验组的菌回收率=(实验组平均菌落数—供试品对照组平均菌落数)/菌液组的平均菌落数稀释剂对照组的菌回收率=稀释剂对照组平均菌落数/菌液组的平均菌落数2.1.4评价标准细菌、霉菌及酵母菌回收率试验采用先制成1:10供试液,再用薄膜过滤法检查,试验组的回收在70%以上,表明可用上述方法检查细菌、霉菌及酵母菌。2.1.5结果经过培养和计数,控制菌(大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌以及黑曲霉)的回收率结果如表1、表2。表1试验组回收率结
7、果表2稀释剂对照组回收率结果从以上二表中的数据可以看出,实验组各控制菌的的回收率均高于70%,稀释既对照组的回收率也高于70%,说明用含5%乙醇的0.1%蛋白胨溶液500ml分5次冲洗滤膜的这种方法可行。2.2控制菌(大肠埃希菌)方法验证过程2.2.1供试液的制备方法同2.1.22.2.2方法验证过程2.2.2.1试验组取1:10供试液10ml,加入500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液中,摇匀,立刻过滤,滤膜用500ml含5%乙醇的0.1%无菌蛋白胨溶液分5次冲洗后,用注射器加入大肠埃希菌菌液1ml,滤干,取滤膜加至100ml胆盐乳糖培养基中
8、,于35℃的培养箱中培养18-24h。取培养物0.2ml,接种于5mlMUG培养基中,35℃的培养箱中培养5
此文档下载收益归作者所有