对乙酰氨基酚混悬滴剂微生物限度检查法的验证

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1、对乙酰氨基酚混悬滴剂微生物限度检查法的验证济南市盘晶药晶检验检测中心济南250106摘要：目的：建立对乙酰氨基酚混悬滴剂微生物限度检查方法并进行验证。方法：按照《中国药典》2010年版二部的要求，对细菌、霉菌及酵母菌计数方法和控制菌检查方法进行验证。结果：对乙酰氨基酚混悬滴剂可按常规法进行微生物限度检查。结论：应对该药品的微生物限度检查建立方法并进行验证。关键词：对乙酰氨基酚混悬滴剂；微生物限度检查；方法验证对乙酰氨基酚混悬滴剂主要成份为对乙酰氨基酚，用于儿童流行性感冒或普通感冒引起的发热，亦用于缓解轻、中度的头痛、神经痛、牙痛、肌

2、肉痛、关节痛等。根据该药品的成份及适应症，应对该药品的微生物限度检查方法进行验证。1.试药、仪器与培养基1.1试药对乙酰氨基酚混悬滴剂(上海强生制药有限公司，批号：150204063)1.2仪器电热恒温培养箱，电子天平，高压蒸汽灭菌器。1.3实验用菌种枯草芽孢杆菌［CMCC〔B)63501］、金黄色葡萄球菌［CMCC(B)26003］、大肠埃希菌［CMCC〔B)44102］、黑曲霉［CMCC〔F)98003］、白色念珠菌［CMCC〔F)98001］,以上第三代菌种均购自山东省食品药品检验研究院。1.4培养基营养肉汤培养基(13052

3、23)，pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液(1303232)，营养琼脂培养基(1305223),玫瑰红钠培养基(130523)，改良马丁培养基(130211),北京三药科技开发公司；MUG培养基(20121126),胆盐乳糖培养基(20130326),青岛高科园海博生物技术冇限公司。1.5供试液制备取供试品10ml,加pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,混匀，作为1:10的供试液。2.细菌、霉菌及酵母菌计数方法验证2.1菌液制备取人肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34°C培养24小吋，取白

4、色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，26°C培养24小吋，上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用；取黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂斜面培养基上，26°C培养7天，加入5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，吸出孢子悬液至无菌试管，用含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的孢子悬液备用。2.2细菌计数方法验证[1]2.2.1试验组取1:10的供试液lml注入平皿中，再分别注入lml2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草

5、芽孢杆菌菌悬液，倾注营养琼脂培养基。2.2.2菌液组各取lml2.1中制备好的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌悬液，分别注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。2.2.3供试品对照组取1:10的供试液lml注入平皿中，倾注营养琼脂培养基。2.3霉菌及酵母菌计数方法验证2.3.1试验组取1:10的供试液lml注入平皿中，再分别注入lml2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。2.3.2菌液组各取lml2.1中制备好的白色念珠菌菌悬液和黑曲霉孢子悬液，分别注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。2.3.3

6、供试品对照组取1:10的供试液lml注入平皿中，倾注玫瑰红钠琼脂培养基。各试验菌分别进行3次独立的平行试验，分别计算各试验菌每次实验的冋收率。各组计数及试验组的菌数冋收率见表1。2.4结果表1显示5株试验菌株的3次回收率均高于70%，对乙酰氨基酚混悬滴剂可用常规法进行细菌、霉菌及酵母菌计数。3控制菌检査方法验证[1]3.1菌液制备取大肠埃希菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，34°C培养24小时,上述培养物用0.9%氯化钠溶液稀释到50-100cfu/ml的菌悬液备用。3.2供试品组取1:10供试液10ml接种至100ml胆盐乳糖培养

7、基中,34°C培养24小吋，取上述培养物0.2ml至5mlMUG培养基试管中，于5小吋、24小时在366nm紫外光下观察；沿培养管的管壁加入数滴錠基质试液，观察液面颜色。3.3试验组取1:10供试液10ml、3.1中制备好的大肠埃希菌菌悬液lml(50-100cfu)接种至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。3.3阳性对照实验取3.1中制备好的人肠埃希菌菌悬液lml(50-100cfu)至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3.2。3.4阴性对照实验取pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液10ml至100ml胆盐乳糖培养基中，方法同3

8、.2。观察结果见表23.5结果试验组检出大肠埃希菌，表明对乙酰氨基酚混悬滴剂可用常规法进行控制菌检査。4讨论通过方法验证，对乙酰氨基酚混悬滴剂可以采用常规平皿法进行细菌、霉菌和酵母菌计数，可用常规法进行控制菌检查。中国药典规定所冇药品