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1、环酯红霉素干混悬剂微生物限度检查方法的建立论文【摘要】目的通过对环酯红霉素干混悬剂进行验证试验，确定适宜的微生物限度检查的方法。方法及结果细菌采用薄膜过滤法，当冲洗量为1000mL时可消除抑菌作用；真菌采用常规法检验，人工污染真菌的回收率均高于70%。结论环酯红霉素干混悬剂微生物限度检查细菌应采用薄膜过滤法，冲洗量为1000mL；真菌采用常规法检验，大肠埃希菌采用薄膜过滤法，冲洗量为800mL。【关键词】微生物限度检查方法薄膜过滤法常规法抑菌作用环酯红霉素干混悬剂为新型大环内酯类抗生素，是红霉素的半合成衍生物.freelL加9
2、mL盐水，10倍稀释至10-5～10-7，细菌数约为50～100cfu/mL，做活菌计数备用。2.1.2取经25℃培养18～24h的白色念珠菌真菌液体培养物1mL加9mL盐水,10倍稀释至10-5～10-6，细菌数约为50～100cfu/mL，做活菌计数备用。2.1.3取经25℃培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3～5mL盐水洗下真菌孢子，吸取出菌液，然后取1mL加9mL盐水，10倍稀释为10-3，细菌数约为50～100cfu/mL，做活菌计数备用。2.2供试品的制备取本品10g,溶于100mL的pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液中，
3、作为1∶10供试液。2.3试验组分别取1∶10供试液,以500r/min离心5min,，分别取上清液1mL薄膜过滤，以pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液冲洗，每次100mL，在最后一次冲洗液中分别加入试验菌少于100cfu/mL金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌1mL；过滤取出滤膜，分别贴于营养琼脂平皿中于30～35℃培养,每天观察结果，计数。2.4菌液组测定每一菌株的试验菌数，采用平板菌落计数法。2.5供试品组不加菌液，其他操作同试验组，测量样品本底菌数。2.6稀释剂对照组取pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，按试验组
4、的冲洗量过滤，在最后一次冲洗液中逐一加入试验菌，取出滤膜分别接种于相应培养平皿中培养计数。2.7结果采用薄膜过滤法测定的回收率结果见表1。结果表明，当冲洗量为1000mL时，可消除抑菌作用。表1薄膜过滤法验证试验结果（略）Tab.1Testresultsofmembranefiltration3黑曲霉菌和白色念珠菌的验证［2，3］3.1供试品的制备取本品10g,溶于100mL的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，制成1∶10的供试液。3.2试验组取2组平皿，每组2个，分别取1∶10供试液1mL和50～100cfu/mL试验菌株1
5、mL同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基,于24～28℃培养,每天观察结果,计数。3.3菌液组测定每一菌株的试验菌数，采用平板菌落计数法。3.4供试品组不加菌液，其他操作同试验组，测量样品本底菌数。3.5结果采用常规法测定的回收率结果见表2。结果表明黑曲霉菌和白色念珠菌的回收率均大于70%。表2常规法验证试验结果（略）Tab.2Testresultsofplatecountmethod4控制菌大肠埃希菌检查方法验证［2，3］4.1供试品的制备取本品10g,溶于100mL的pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液中，以500r/min离心5
6、min（10mL/管），合并上清液作为1∶10的供试液。4.2试验组取1∶10供试液10mL,.freelL，共冲洗8次,在最后一次冲洗液中分别加入1mL大肠埃希菌，过滤取出膜，培养于100mL胆盐乳糖增菌液中,于30～35℃培养24h，观察结果。4.3阴性对照组取1∶10供试液10mL,薄膜过滤，以pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液为冲洗液冲洗，每次100mL，共冲洗8次,在最后一次冲洗液中分别加入1mL金黄色葡萄球菌液，过滤，取出膜培养于100mL胆盐乳糖增菌液中,于30～35℃培养24h,观察结果。4.4取上述培养物各0.2
7、mL接种至5mLMUG培养基试管内培养，于5h、24h在365nm的紫外灯下观察，同时用未接种的MUG培养基做本底对照。结果见表3。表3大肠埃希菌检查方法验证结果（略）Tab.3ValidationtestresultsofEscherichiacoli5讨论5.1从表1结果可知，环酯红霉素干混悬剂细菌数检查采用薄膜过滤法，通过不同的冲洗量，测定人工染菌回收率，总冲洗量为800mL时，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌回收率均低于70%，方法还是不可行；当总冲洗量为1000mL时，人工污染3株代表菌株，金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯
8、草芽孢杆菌的回收率均高于70%，符合中国药典微生物限度验证方法的要求，故可采用薄膜过滤法进行检验。5.2环酯红霉素干混悬剂为广谱抗生素，主要作用于细菌，从表2结果可知，采用常规法测定真菌和酵母菌数，人工污染2株代表菌株，白色念珠菌、黑曲霉回收率均高于70%，符合规定中国药典微
