医药学医学毕业论文 吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析

《医药学医学毕业论文 吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学医学论文题目：吸烟者树突状细胞的功能状态研究分析指导老师：XXX二〇一一年十二月十日【摘要】目的研究吸烟者树突状细胞(DC)的功能。方法分离吸烟者和非吸烟者外周血单个核细胞(PBMC)，在含粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素4(IL-4)的培养条件下制备DC。流式细胞仪检测DC表面CD86的表达；混合淋巴细胞反应(MLR)检测DC对T淋巴细胞的刺激能力；酶群免疫吸附法(ELISA)测定MLR上清液中细胞因子水平。结果与非吸烟者比较，吸烟者DC表面CD86的表达明显增高，对T淋巴细胞的刺激能力增强；致炎细

2、胞因子(IL-1β)分泌增多，抑炎因子(IL-10)分泌减少。结论吸烟者DC明显激活，可能是吸烟致动脉粥样硬化的机制之一。【关键词】吸烟；树突状细胞；细胞因子；动脉粥样硬化【Abstract】ObjectiveToinvestigatethefunctionofdendriticcells(DCs)insmokingperson.MethodsDCswerederivedfromhumanperipherybloodmonocytecells(PBMCs)uponculturewithinterleukin-4(IL-4)andgranulocytemacrophagecolonystimu

3、latingfactor(GM-CSF)fromsmokingperson.Thesurfaceco-stimulatoryfactorCD86(7-2)ofDCswereassessedbyflowcytometry.Immunostimulatorycapacitywasmeasuredbymixedlymphocytereaction(MLR).ELISAwasusedtoanalyzethelevelofcytokines(IL-1β，IL-10).ResultsMuchmoreCD86wasexpressedonDCsfromsmokingperson.Thestimulating

4、capacityofDCsinMLRwashigher，andtheTlymphocytesinMLRproducedhigherlevelsofpro-inflammationcytokinesandlowerlevelsofrestrin-inflammationcytokines，comparedwithnormalgroup.ConclusionDCsofsmokingpersonareactivated，whichmayplayanimportantroleintheprogressofatherosclerosis(AS).近年发现免疫炎性反应在促进动脉粥样硬化(atherosc

5、lerosis，AS)发病中起重要作用［１］。研究发现体内功能最强的专职性抗原提呈细胞树突状细胞(dendriticcell，DC)在AS斑块中聚集增多，提示其所介导免疫炎性反应参与了AS的发生和发展［２］。吸烟是心脑血管疾病的重要危险因素之一［３］，有观察表明吸烟可激活体内的炎性反应［４］，但吸烟是否影响DC功能从而促进AS的发生与发展，目前尚少有报道。本文通过观察吸烟者DC的功能状态，进一步阐明吸烟致AS的可能机制。1对象与方法1.1研究对象选取吸烟和非吸烟者各30例，两组年龄、性别等无明显差异。所有对象均排除急慢性炎性疾病、自身免疫性疾病及肿瘤，未用激素及免疫抑制剂。1.2材料RPMI

6、1640(L-glutamine)培养基、胎牛血清(FCS)购自Gibco公司；淋巴细胞分离液购自天津灏洋生物制品有限公司；四唑盐(MTT)、二甲亚砜(DSMO)购自广州威佳公司；重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白介素-4(rhIL-4)购自英国Peprotech公司；PE标记的鼠抗人CD86(B7-2)单抗购自Biolegend公司；白细胞介素-1β(IL-1β)、白介素-10(IL-10)ELISA试剂盒购自美晶公司。1.3方法1.3.1DC制备抽取受试者外周血20ml，淋巴细胞分离液中离心(2000r/min，20min)，收集单个核细胞(PBMC)，PBS

7、冲洗2次，RPMI1640冲洗1次，用完全RPMI1640(含10%FCS)在6孔培养板中培养2h(37℃，5%CO2)，去掉非贴壁细胞。贴壁细胞用完全RPMI1640(含10%FCS、rhGM-CSF100ng/ml、rhIL-4500u/ml)培养液，置37℃、5%CO2温箱中培养7天，隔天半量换液1次。收集培养第7天的悬浮细胞即DC进行实验。1.3.2DC形态于培养第1、3、5、7天在倒置显微镜下观察D