k562细胞对树突状细胞线粒体功能和能量代谢状态的影响

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1、K562细胞对树突状细胞线粒体功能和能量代谢状态的影响许晓风第一作者/通讯作者简介：许晓风，生于1978年，女，主治医师，北京大学生物物理学博士，现从事血液肿瘤相关的临床诊断、科研和教学工作。联系电话：13520042232，010-58268691，邮箱：xuxiaofeng1978@sohu.com，李爽，李昊淼（首都医科大学附属北京同仁医院检验科，北京，100730）[摘要]目的探讨共培养条件下血液肿瘤K562细胞对树突状细胞线粒体功能和能量代谢状态的影响，从而进一步探索血液肿瘤的免疫逃逸机制，为临床血液肿瘤治疗提供新思路。方法依据免疫磁珠分离方法从健康人外周血中分离纯化出单

2、核细胞，用细胞因子GM-CSF和IL-4将单核细胞诱导分化为未成熟DCs（immatureDCs，imDCs），再利用细胞因子TNF-α进一步将imDCs诱导为成熟DCs（matureDCs，mDCs），在transwell系统中分别将imDCs和mDCs与K562细胞共培养48h，利用流式细胞技术研究K562细胞对DCs的线粒体膜电位、细胞内钙离子浓度的影响，利用MTT比色法研究线粒体酶活力变化,利用傅立叶变换红外光谱（Fouriertransforminfraredspectroscopy,FTIR）技术研究细胞能量代谢状态。对照组为正常培养和撤细胞因子培养48h的DCs。结果

3、与K562细胞共培养后，和对照组DCs相比，imDCs和mDCs的线粒体膜电位下降（P<0.05），imDCs和mDCs胞内钙离子浓度增加（P<0.01），imDCs和mDCs的线粒体酶活力下降（P<0.05，P<0.01），imDCs和mDCs的细胞能量代谢减低（P<0.01），而正常培养组和撤细胞因子后再培养48h的DCs组相比无显著差别。结论与K562细胞共培养后DCs的线粒体功能受到损伤，细胞能量代谢受到抑制，K562细胞可能通过损伤DCs的线粒体功能，抑制细胞能量代谢状态来损伤其迁移能力，进而损伤其免疫功能,从而使血液肿瘤细胞逃脱机体免疫监视，实现血液肿瘤细胞的增殖、扩散

4、和转移。[关键词]树突状细胞；K562细胞；线粒体膜电位；线粒体酶活力；傅立叶变换红外光谱TheimpactofK562cellsonmitochondrialfunctionandenergymetabolismstatusofdendriticcellsXuXiao-feng,LiShuang,LiHao-miao(TheclinicallaboratoryofBeijingTongrenHospital,CapitalMedicalUniversity,Beijing100730,China)[Abstract]ObjectiveTostudytheimpactofK562c

5、ellsonmitochondrialfunctionandenergymetabolismstatusofdendriticcells(DCs)whenco-culture,inordertoinvestigatethemechanismsoftumourimmuneescapeandgivenewpointstoclinicaltreatmentofleukemia.MethodsThemonocyteswerepurifiedfromfreshperipheralbloodofhealthyhumanwithimmunemagneticbeadsandthenwerecult

6、uredinthemediacontaining100ng/mlrhGM-CSFand100ng/mlIL-4inRPMI1640/10%FBStoinduceintoimmatureDCs（imDCs）,andmatureDCs（mDCs）weredevelopedbyadd20ng/mlrhTNF-αintoimDCsculture.TheresultingimDCsandmDCswererespectivelyco-culturedwithK562cellsintranswellchamberfor48h,cellsincludingculturedinnormalmediu

7、mfor48handculturedinmediumwithoutcytokinesfor48hservedascontrols.TheDCsmitochondrialmembranepotentialandintracellularCa2+concentrationinthecytoplasmwererespectivelymeasuredbyflowcytometry，mitochondrialenzymeactivitywerestudiedbyMTTassay