医药学医学毕业论文 兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定

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1、湖南师范大学本科毕业论文考籍号：XXXXXXXXX姓名：XXX专业：医药学医学论文题目：兔骨髓间充质干细胞的分离、培养与鉴定指导老师：XXX二〇一一年十二月十日作者：叶发刚夏长所张卫兵夏仁云【关键词】骨髓间充质干细胞;兔;离心法,梯密度;,细胞培养技术　　［摘要］目的优化获取兔骨髓间充质干细胞并对其进行纯化、鉴定，同时对其生物学性状进行研究。方法取新生新西兰大耳白兔骨髓5.0mL，采用密度梯度离心法、贴壁筛选法并结合传代对其进行纯化，观察细胞形态、超微结构和表面标志物的表达，从而对其进行鉴定。观察第1、3、5、8、10代细胞的增殖情况，并绘制出生长曲线。结果经密度梯度离

2、心、贴壁筛选并结合传代所得到的间充质干细胞很纯，第3代和第5代细胞形态单一，细胞排列具有典型的漩涡状结构。第1、3、5代细胞增殖能力强，生长旺盛;而第8、10代细胞增殖明显减弱。所分离培养的细胞表达CD44、CD90，不表达CD34，电镜观察为低分化细胞。结论分离培养的细胞为间充质干细胞且成分单一，具有干细胞特性，第3、5代细胞很纯且其增殖能力强，适用于做以后的研究。　　［关键词］骨髓间充质干细胞;兔;离心法，梯密度;细胞培养技术　　［ABSTRACT］ObjectiveToexploretheapproachestoisolate，cultureandidentify

3、thebonemarrow-derivedmesenchymalstemcells（BM-MSCs）ofrabbits.MethodsBM-MSCswereisolatedfromthebonemarrow（5.0mL）ofthenewbornrabbitviadensitygradientcentrifugation.Lightandelectronmicroscopywereusedtostudythemorphologicfeaturesandimmunocytochemis-trytoexaminetheexpressionofcellsurfaceantige

4、ns.Thegrowthcurveofcellproliferationwasobtainedbasedontheobservationoftheproliferationstatusof1st，3rd，5th，8th，and10thgeneration.ResultsBM-MSCsof1st，3rd，5thgenerationwereverypurifiedandallinthewhirlpool-shape.Theyproliferatedmorerapidlythanthoseof8thand10thgeneration.Theseculturedcellssho

5、wedimmunoreactivitytoCD44andCD90butnotCD34andlow-differentiationundertheelectronmicroscopy.ConclusionPurifiedBM-MSCscanbeobtainedviathisprotocol.Cellsof1st，3rd，5thgenerationwithhighproliferationarefittothefurtherexperiment.　　［KEYWORDS］mesenchymalstemcells;rabbits;centrifugation，densitygr

6、adient;cellculturetechniques　　骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcell，MSC）是一种具有多向分化潜能的干细胞，特定条件下可向成骨细胞、成软骨细胞、肌腱细胞、脂肪细胞等细胞分化［1］。但骨髓中MSC的数量有限，含量极低，MSC所占的比例非常小，通常105～106个骨髓有核细胞中仅有1个MSC［2］。体外如何获取、纯化MSC并使其高效快速增殖是组织工程技术应用和推广的前提。本实验联合应用密度梯度离心和贴壁筛选的方法从骨髓中分离MSC并对其纯化，观察其在整个生命周期的形态、传代、增殖状态、细胞的超微结构及细胞表面抗原的表达，探讨

7、体外分离培养MSC的生长规律，为大规模地获得生物学性状良好的骨髓MSC，进一步研究骨髓MSC的诱导分化和应用奠定基础。　　1材料与方法　　　1.1实验动物新西兰纯种大耳白兔1只（2月龄），雌性，体质量3.0～4.0kg，由同济医学院实验动物中心提供，同济医学院附属协和医院实验动物中心饲养。　　　　1.2实验方法　　1.2.1MSC取材与原代培养将大白兔用3g/L戊巴比妥钠（1.0mL/kg）耳缘静脉麻醉后，侧卧手术台上，于髂后上嵴处剪毛备皮，体积分数0.01活力碘消毒，铺无菌洞巾，2g/L利多卡因手术部位局部麻醉。16号骨髓穿刺针接10m