我国口岸出入境人员HIV-1基因亚型分析.doc

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1、我国口岸出入境人员HIV-1基因亚型分析【摘要】目的研究我国口岸检出的人类免疫缺陷病毒Ⅰ型（HIV-1）感染者的HIV-1gag区基因序列特征，了解亚型种类，为艾滋病的监控和防制提供科学依据。方法从HIV阳性的出入境人员血浆中提取病毒核酸，之后采用RT-PCR法扩增gag区基因，对该段序列进行测定分析。结果2004～2006年确认的39例HIV阳性标本，根据gag区基因序列系统树分析显示，共有8种亚型，其中12例C亚型，9例CRF01_AE重组，6例CRF07_BC重组，5例CRF08_BC重组，4例B亚型，1例B

2、’亚型，1例CRF02_AG重组和1例A1亚型。结论北京口岸检出的HIV-1亚型种类较为复杂，研究口岸艾滋病病毒的变异特点和传播来源对于我国艾滋病的防治具有重要作用。【关键词】HIV-1；gag基因；亚型分析【Abstract】ObjectiveToanalyzegagsequencecharacteristicsofHIV-1infectedpeoplefoundatChinaport，tolearnsubtypeandtoprovidescientificreferenceforAIDSsupervisiona

3、ndcontrolinChina.MethodsToextractHIV-1RNAfromHIVpositiveplasmafromentry-exitpopulations，thenHIV-1gaggenewereamplifiedbyRT-PCRandsequencewasanalyzed.ResultsPhylogenetictreeanalysisshowedthatthereexisted8kindsofsubtypeamong39HIVpositivesamplesconfirmedfrom2004to

4、2007，consisting12casesofC，9casesofCRF01_AE，6casesofCRF07-BC，5casesofCRF08_BC，4casesofB，1caseofB’，1caseofCRF02_AGand1caseofA1.ConclusionThesubtypesofHIV-1testedatChinaportwerecomplexandresearchonHIVvariationcharacteristicsandspreadingsourceatportwillplayanimpor

5、tantroleinAIDSpreventationandtreatment.【Keywords】HIV-1;gaggene;subtypeanalysis艾滋病是由人类免疫缺陷病毒(Humanimmunodeficiencyvirus，HIV)引起的一类死亡率极高的传染性疾病，对全球、尤其是亚洲和非洲等广大发展中国家人民的生命健康安全威胁极大［1］。到目前为止，根据不同的地理区域可将HIV-1分为M组、O组和N组，到目前为止，其中占全球HIV-1流行毒株90%以上的M组按其gag基因和env基因的变异程度又可分为

6、9种单一亚型（A～D,F～H,J和K）和19种循环重组型（CRF01至CRF19）（LosAlamosNationalLaboratory［http://www.hiv.lanl.gov］）。已发现不同亚型在不同地区和不同高危人群中的分布不同［2,3］，出入境人员是一个来自世界各地的复杂而具有特殊意义的群体，对于我国HIV的传入传出以及今后的流行趋势具有重要的意义。因此对我国质检系统检出的出入境HIV-1感染者进行了病毒基因亚型鉴定和基因序列分析，从而为我国艾滋病的防治策略提供参考依据。41材料与方法1.1研究对象

7、受检人员为国外入境人员及中国出入境人员。包括由国家质量监督检验检疫总局以及北京国际旅行卫生保健中心HIV确认实验室检出的共39份出入境人员HIV抗体阳性血浆样品，予-20℃保存。1.2核酸的提取采用德国Qiagen公司的QIAampViralRNAMiniKit试剂盒提取血浆HIV病毒核酸RNA。1.3gag基因的PCR扩增针对gag基因的引物（见表1）由北京赛百盛基因技术有限公司合成，用无核酸酶的水配成应用浓度。以GAG-L和GAG-E2为外引物，GUX和GDX为内引物，采用TaKaRa宝生物工程（大连）有限公司

8、的One-stepRT-PCR试剂盒对gag基因进行扩增。PCR反应条件为：第一轮外侧引物扩增时，50℃30min，94℃5min，55℃1min，72℃2min，1个循环；94℃30s，55℃45s，72℃90s，30个循环；72℃延伸10min；4℃保温。第二轮内侧引物扩增时，94℃2min，55℃1min，72℃90s，1个循环；94℃30s，55℃4